[发明专利]一种TM4SF1基因mRNA核酸检测试剂盒和检测方法

权利要求书

1.一种TM4SF1基因mRNA核酸检测试剂盒，其特征在于：包括荧光定量PCR引物和探针、阳性对照和阴性对照，

所述阳性对照为TM4SF1基因阳性对照为表达TM4SF1基因的肿瘤细胞系，

所述阴性对照为无菌水，

所述荧光定量PCR引物和探针包括组分1和组分2，所述组分1：包括用于扩增TM4SF1基因的上游引物F1和下游引物R1、用于扩增对照基因GADPH的上游引物F2和下游引物R2，上述4条引物的核苷酸序列分别为：

F1：5’-CCGCTTCGTGTGGTTCTTT-3’

R1：5’-CCAGCCCAATGAAGACAAATG-3’

F2：5’-ATTCCACCCATGGCAAATTC-3’

R2：5’-GATGGGATTTCCATTGATGACA-3’；

所述组分2：包括用于检测TM4SF1基因的探针Probe1和用于检测对照基因GADPH的探针Probe2，上述2条探针的核苷酸序列分别为：

Probe1：5’-FAM-CATCGTAGGAGGTGGC-BHQ1-3’

Probe2：5’-VIC-CCGTTCTCAGCCTTGACGGTGC-BHQ1-3’。

2.如权利要求1所述的TM4SF1基因mRNA核酸检测试剂盒，其特征在于：所述用于扩增TM4SF1基因的上游引物F1和下游引物R1以及用于检测TM4SF1基因的探针Probe1的高通量比为F1:R1:Probe1为9:9:2.5。

3.如权利要求1所述的TM4SF1基因mRNA核酸检测试剂盒，其特征在于：所述用于扩增对照基因GADPH的上游引物F2和下游引物R2以及用于检测对照基因GADPH的探针Probe2的高通量比为F2:R2:Probe2为9:9:2.5。

4.如权利要求1所述的TM4SF1基因mRNA核酸检测试剂盒，其特征在于：还包括用于进行PCR试验的常规试剂，所述常规试剂包括5×MLV逆转录缓冲液，50μM逆转录引物Oligo-dT，2.5mMdNTPs溶液，10U/μl MLV逆转录酶，10×定量PCR缓冲液，2U/μl TaqDNA聚合酶。

5.利用TM4SF1基因mRNA核酸检测试剂盒的检测方法，其特征在于：包括以下步骤：1)取外周血样本，采用RNA提取试剂盒，利用过柱法从待测外周血中提取总RNA，测RNA的浓度；2)使用常规试剂配制逆转录体系，将步骤1)所得RNA逆转录为待测cDNA；3)分别以步骤2)所得待测cDNA、TM4SF1基因阳性对照所得cDNA以及阴性对照为模板，进行荧光定量PCR；4)在荧光定量PCR扩增仪中扩增，收集FAM、VIC荧光信号；5)扩增结束后，根据荧光曲线判断样本中是否存在TM4SF1的表达。

6.如权利要求5所述的利用TM4SF1基因mRNA核酸检测试剂盒的检测方法，其特征在于：所述步骤2)的转录体系包括：5×MLV逆转录缓冲液10μL，10U/μLMLV逆转录酶2μL，50μM逆转录引物Oligo-dT2μL，2.5mMdNTPs溶液8μL，RNA模板14μL，RNAse抑制剂2μL，DEPC水12μL。

7.如权利要求5所述的利用TM4SF1基因mRNA核酸检测试剂盒的检测方法，其特征在于：所述步骤2)的逆转录反应的处理时间及温度为：37℃，1h。

8.如权利要求5所述的利用TM4SF1基因mRNA核酸检测试剂盒的检测方法，其特征在于：所述步骤3)的PCR体系包括：10×定量PCR缓冲液2μL，Taq酶0.8μL，荧光定量PCR引物和探针组分3.2μL，cDNA样本4μL，2.5mMdNTPs溶液1.8μL，DEPC水8.2μL。