[发明专利]一种针对中华绒螯蟹螺原体的特异性卵黄抗体及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种针对中华绒螯蟹螺原体的特异性卵黄抗体及其制备方法和应用，所述抗体为抗S.eriocheiris的特异性IgY抗体，是由破碎后的螺原体注射进母鸡体内，从鸡蛋的卵黄中分离并纯化得到的特异性抗体。该特异性抗体可通过饲料饲喂或注射等方式应用于中华绒螯蟹抵抗S.eriocheiris的感染中，结果证明与现有的治疗中华绒螯蟹颤抖病的方法相比，本发明的方法对环境无污染、针对性强、效果显著。本发明成功地证明了抗S.eriocheiris特异性IgY在中华绒螯蟹抵抗S.eriocheiris感染过程中的潜在作用，并可以应用于水产养殖中以提高中华绒螯蟹的产量和渔民的收入，促进中华绒螯蟹养殖产业的发展。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种针对中华绒螯蟹螺原体的特异性卵黄抗体及其制备方法和应用。

背景技术

中华绒螯蟹俗称河蟹，是中国水产养殖业中的重要养殖品种之一，随着国际和国内市场需求的迅速增加，其产业也迅速发展，以满足市场的需要。随着中华绒螯蟹产业的集约化发展，各种细菌、病毒、寄生虫或者理化因素导致的疾病暴发对其产业的可持续发展造成了严重的制约，其中由中华绒螯蟹螺原体(Spiroplasma eriocheiris)引起的颤抖病是对中华绒螯蟹养殖产业最具破坏性的疾病，目前对于该疾病的致病机理、检测和防治工作已经取得了一系列的研究成果。目前该疾病的治疗还是主要依靠土霉素等抗生素的使用，但是，抗生素等化学药物的滥用可能会导致药物残留、耐药菌产生、环境污染以及水生动物免疫系统损伤等一系列问题。而耐药菌的传播会大大减少可用防治措施的选择，并增加治愈难度和导致感染引起的死亡，因此，迫切需要有效且无污染的抗生素替代品。

目前，还没有关于在中华绒螯蟹中使用特异性IgY对抗S.eriocheiris感染的研究。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明的目的是验证IgY在中华绒螯蟹防治S.eriocheiris感染中的作用，以预期用特异性抗S.eriocheiris IgY防治中华绒螯蟹颤抖病，进而增加中华绒螯蟹在感染S.eriocheiris过程中的存活率，以提高中华绒螯蟹的产量和渔民收入。因此，本发明提供了一种针对中华绒螯蟹螺原体的特异性卵黄抗体及其制备方法和应用。

本发明是通过以下技术方案实现的：

一种针对中华绒螯蟹螺原体的特异性卵黄抗体，所述抗体为抗S.eriocheiris的特异性IgY抗体，是由破碎后的螺原体注射进母鸡体内，从鸡蛋的卵黄中分离并纯化得到的特异性抗体。

一种针对中华绒螯蟹螺原体的特异性卵黄抗体的制备方法，包括以下步骤：

步骤1)将S.eriocheiris在R2培养基中培养24h后离心去上清，并用PBS重悬；

步骤2)将经步骤1)重悬后的S.eriocheiris进行超声破碎，并于20℃保存备用；

步骤3)对母鸡进行肌肉注射，注射1mL 200～400μg/mL经步骤2)破碎后的S.eriocheiris，生产特异性抗体IgY；

步骤4)对母鸡进行3次注射，间隔2周，每天收集鸡蛋，直至第九周，提取鸡蛋卵黄，从卵黄中分离出IgY并纯化，即得。

一种针对中华绒螯蟹螺原体的特异性卵黄抗体在抑制S.eriocheiris生长方面的应用。

一种针对中华绒螯蟹螺原体的特异性卵黄抗体在抑制S.eriocheiris生长方面的应用，包括以下步骤：

步骤a)从注射了200～400μg/mL的S.eriocheiris的鸡卵黄中分离出IgY并纯化；

步骤b)将步骤a)得到的IgY以滴度为1:1～30000的比例进行稀释，得到特异性IgY；