[发明专利]猪圆环病毒2型LAMP检测引物组及试剂盒

说明书

本发明公开了猪圆环病毒2型LAMP检测引物组及试剂盒，猪圆环病毒2型LAMP检测引物组包括6条引物，具体核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.6所示。猪圆环病毒2型LAMP检测试剂盒包含上述引物组外，还包含Bst DNA聚合酶、dNTP、MgSO₄、Betaine、10Ｘ LAMP反应缓冲液、HNB、阳性对照质粒等成分。本发明试剂盒具有灵敏度高、特异性好、反应时间短、结果可视化、配套仪器简单等一系列优点，不仅适用于大型养殖单位和高端实验室，也适用于广大中小养殖单位和普通实验室。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及猪圆环病毒2型LAMP检测引物组及试剂盒。

背景技术

猪圆环病毒(Porcine circovirus，PCV)属于圆环病毒科(Circoviridae)圆环病毒属，是单股DNA病毒，无囊膜。根据其发现的先后、致病性和核酸序列的差异可分为2型，即PCV1和PCV2。PCV1无致病型，而PCV2具有致病型。

猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2，PCV2)是单股负链环状无囊膜的DNA病毒，其基因组全长1.7kB。PCV2感染后主要引起断奶仔猪多系统衰竭综合征(Postweaning multisystemic wasting syndrome，PMWS)，能够与许多病原体并发或继发感染，在猪机体内引起免疫抑制。

自1991年加拿大猪群中首次暴发PCV2以后，在世界各地猪群中广泛流行。PCV2相关性疾病(Porcine circovirus associated disease，PCVAD)是一组复杂的、多因子疾病，除了引起PMWS以外，常发的还有猪皮炎与肾病综合症(Porcine dermatitis andnephropathy syndrome，PDNS)等，给世界养猪业造成了巨大的经济损失。

PCV2的诊断方法有临床诊断、病毒分离鉴定、酶联免疫吸附实验(ELISA)、普通PCR和荧光定量PCR等，其中：临床诊断无法确诊，病毒分离鉴定太过复杂繁琐，ELISA检测只有在动物产生抗体后才能检测出来从而导致检测时间延后，普通PCR检测需要在扩增完成后通过电泳才能获得检测结果，而荧光定量PCR检测需要使用昂贵的荧光定量PCR仪从而限制了该方法的使用范围。

LAMP(Loop Mediated Isothermal Amplification，环介导等温基因扩增技术)是一种新型的核酸扩增技术，在2000年由日本科学家发明。该技术具有灵敏度高、特异性好、反应时间短、结果可视化、配套仪器简单等一系列优点。利用该技术开发的产品，具有以下两个优点：(1)配套仪器成本低：一个普通水浴锅即可完成检测反应；(2)结果可视化，产品使用范围大大扩展：不仅大型养殖单位和高端实验室可以使用，广大中小养殖单位和普通实验室也可以使用。

发明内容

为了克服传统PCV2检测方法固有的缺点，本发明的目的在于提供猪圆环病毒2型LAMP检测引物组及试剂盒。

本发明是通过如下技术方案实现的：

首先，选取PCV2病毒基因组的保守序列，设计了针对PCV2病毒的LAMP检测引物组，具体核苷酸序列如下：

SEQ ID NO.1(PCV2-F3):5′-gctgtgagtaccttgttggag-3′

SEQ ID NO.2(PCV2-B3):5′-acaaccacttcttcaccatg-3′

SEQ ID NO.3(PCV2-FIP):5′-tgcattttcccgctcactttcttgcagagcagcaccctgtaac-3′