[发明专利]一种抗前胃泌素释放肽单克隆抗体及其制备方法

权利要求书

1.一种抗前胃泌素释放肽单克隆抗体，其特征在于：所述的单克隆抗体的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、LCDR3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.5-10所示。

2.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于：所述的单克隆抗体的重链可变区V_H的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，轻链可变区V_L的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。

3.根据权利要求1或2所述的单克隆抗体，其特征在于：所述的单克隆抗体为小鼠单克隆抗体。

4.一种根据权利要求3所述的单克隆抗体的制备方法，其特征在于，所述的制备方法包括如下步骤：

(1)以鼠前胃泌素释放肽或其片段免疫小鼠后取其脾细胞；

(2)将步骤(1)得到的脾细胞与骨髓瘤细胞融合，并通过选择培养和ELISA检测筛选出杂交瘤细胞；

(3)对步骤(2)筛选出的杂交瘤细胞进行克隆化培养和稳定性培养，获得表达抗前胃泌素释放肽抗体的单克隆细胞株；

(4)将步骤(3)获得的单克隆细胞株注射至小鼠腹腔，抽取腹水进行单克隆抗体纯化及鉴定。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于：步骤(1)中，

所述的鼠前胃泌素释放肽或其片段为鼠前胃泌素释放肽的恒定区氨基酸肽段，

所述的小鼠为Balb/c小鼠。

6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于：步骤(2)中，所述的骨髓瘤细胞为SP2/0细胞，所述的选择培养所用培养基为HAT选择培养基。

7.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于：步骤(4)中，利用蛋白A-琼脂糖亲和层析柱进行单克隆抗体纯化。

8.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述的制备方法还进一步包括如下步骤：

(5)对步骤(3)获得的单克隆细胞株进行总RNA的提取，并反转录成cDNA，扩增抗体重链和轻链的可变区，分别连接至载体，转化至感受态细胞后提质粒进行测序。

9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于：步骤(5)中，连接所用载体为pMD 19-T，所用感受态细胞为DH5α。

10.根据权利要求1-3之一所述的单克隆抗体用于制备诊断或治疗肺癌的试剂或药物的用途。