[发明专利]一种抗前胃泌素释放肽单克隆抗体及其制备方法

说明书

本发明属于抗体药物技术领域，涉及一种抗前胃泌素释放肽单克隆抗体及其制备方法。所述的单克隆抗体的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、LCDR3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.5‑10所示。利用本发明的抗前胃泌素释放肽单克隆抗体及其制备方法，能够更好的制备抗前胃泌素释放肽单克隆抗体，制得抗前胃泌素释放肽单克隆抗体可更好的用于SCLC靶向诊治。

技术领域

本发明属于抗体药物技术领域，涉及一种抗前胃泌素释放肽单克隆抗体及其制备方法。

背景技术

肺癌(Lung Cancer)是发病率和死亡率都极高的恶性肿瘤，其中小细胞肺癌(Small Cell Lung Cancer，SCLC)是恶性度较高，治愈率较低的一种肺癌，约占肺癌的15％-20％。SCLC的特点是瘤体倍增时间短、预后差、分化程度最低、极易转移，5年生存率仅为1％-7％。但SCLC对放化疗敏感，如早期发现采用全身化疗伴局部放疗等综合治疗手段，3年生存率可达30％以上，因此SCLC的早期诊断和治疗至关重要。

前胃泌素释放肽(Pro-Gastrin Releasing Peptide，PGRP)是SCLC的可靠、灵敏、特异性的肿瘤标志物，在血液中相对稳定。在物理诊断尚不明确前即可检测到PGRP，阳性率高达76％，已被用于SCLC早期临床诊断。PGRP由信号肽、胃泌素释放肽(Gastrin ReleasingPeptide，GRP)、酶切位点、恒定区以及可变的羧基末端组成。

随着基因工程技术的发展，抗体药物不断用于恶性肿瘤的早期诊断和治疗，并且取得良好的经济效益和社会效益。抗前胃泌素释放肽抗体的研制是SCLC靶向诊治方向之一，可为SCLC病人的诊断和治疗奠定一定的技术和物质基础。

发明内容

本发明的首要目的是提供一种抗前胃泌素释放肽单克隆抗体，以能够更好的用于SCLC靶向诊治。

为实现此目的，在基础的实施方案中，本发明提供一种抗前胃泌素释放肽单克隆抗体，所述的单克隆抗体的HCDR1(重链互补决定区1)、HCDR2(重链互补决定区2)、HCDR3(重链互补决定区3)、LCDR1(轻链互补决定区1)、LCDR2(轻链互补决定区2)、LCDR3(轻链互补决定区3)的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.5-10所示。

在一种优选的实施方案中，本发明提供一种抗前胃泌素释放肽单克隆抗体，其中所述的单克隆抗体的重链可变区V_H的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，轻链可变区V_L的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。

在一种优选的实施方案中，本发明提供一种抗前胃泌素释放肽单克隆抗体，其中所述的单克隆抗体为小鼠单克隆抗体。

本发明的第二个目的是提供一种上述抗前胃泌素释放肽单克隆抗体的制备方法，以能够更好的制备上述抗前胃泌素释放肽单克隆抗体，制得抗前胃泌素释放肽单克隆抗体可更好的用于SCLC靶向诊治。

为实现此目的，在基础的实施方案中，本发明提供一种上述抗前胃泌素释放肽单克隆抗体的制备方法，所述的制备方法包括如下步骤：

(1)以鼠前胃泌素释放肽或其片段免疫小鼠后取其脾细胞；

(2)将步骤(1)得到的脾细胞与骨髓瘤细胞融合，并通过选择培养和ELISA检测筛选出杂交瘤细胞；

(3)对步骤(2)筛选出的杂交瘤细胞进行克隆化培养和稳定性培养，获得表达抗前胃泌素释放肽抗体的单克隆细胞株；

(4)将步骤(3)获得的单克隆细胞株注射至小鼠腹腔，抽取腹水进行单克隆抗体纯化及鉴定。

在一种优选的实施方案中，本发明提供一种上述抗前胃泌素释放肽单克隆抗体的制备方法，其中步骤(1)中，