[发明专利]一种基于探针溶解曲线法的烟曲霉唑类耐药分子检测试剂盒

权利要求书

1.一种检测烟曲霉唑类耐药相关基因突变位点的引物探针组合，其特征在于，所述引物探针组合包括第一引物对、第二引物对、第三引物对和检测探针；

其中，第一引物对的序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示，用于扩增突变位点TR34和/或TR46；

第二引物对的序列如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示，用于扩增突变位点L98H和/或Y121F；

第三引物对的序列如SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示，用于扩增突变位点T289A。

2.根据权利要求1所述的引物探针组合，其特征在于，所述引物探针组合中检测探针的个数为3～5个；

优选地，所述引物探针组合包含5个检测探针，其中：

第一检测探针的序列如SEQ ID NO.7所示，用于检测突变位点TR34；

第二检测探针的序列如SEQ ID NO.8所示，用于检测突变位点TR46；

第三检测探针的序列如SEQ ID NO.9所示，用于检测突变位点L98H；

第四检测探针的序列如SEQ ID NO.10所示，用于检测突变位点Y121F；

第五检测探针的序列如SEQ ID NO.11所示，用于检测突变位点T289A。

3.根据权利要求1或2所述的引物探针组合，其特征在于，所述检测探针携带荧光基团和淬灭基团；

优选地，所述荧光基团包括ALEX-350、Alexa Fluor 488、CY3、FAM、VIC、TET、CALGold540、JOE、HEX、CALFluorOrange560、TAMRA、CALFluorRed590、ROX、CALFluorRed610、TexasRed、CALFluorRed635、Quasar670、CY5、CY5.5、LC RED640或Quasar705中的任意一种或至少两种的组合；

优选地，所述淬灭基团包括TAMRA、DABCYL、BHQ-1、BHQ-2、BHQ-3或Eclipse中的任意一种或至少两种的组合。

4.一种基于探针溶解曲线法的烟曲霉唑类耐药分子检测试剂盒，其特征在于，所述烟曲霉唑类耐药分子检测试剂盒包括如权利要求1～3任一项所述的引物探针组合；

优选地，所述试剂盒还包括阴性对照品、阳性对照品、质控品和PCR反应液。

5.根据权利要求4所述的烟曲霉唑类耐药分子检测试剂盒，其特征在于，所述阳性对照品包括含有烟曲霉唑类耐药突变DNA序列的质粒；

优选地，所述阳性对照品包括：含有TR34基因突变DNA序列的质粒、含有TR46基因突变DNA序列的质粒、含有L98H和Y121F基因突变DNA序列的质粒和含有T289A基因突变DNA序列的质粒；

优选地，所述含有TR34基因突变DNA序列的质粒中，TR34基因突变基因片段的序列如SEQ ID NO.12所示；所述TR46基因突变DNA序列的质粒中，TR46基因突变基因片段的序列如SEQ ID NO.13所示；所述L98H和Y121F基因突变DNA序列的质粒中，L98H和Y121F基因突变基因片段的序列如SEQ ID NO.14所示；所述T289A基因突变DNA序列的质粒中，T289A基因突变基因片段的序列如SEQ ID NO.15所示；

优选地，所述含有TR34基因突变DNA序列的质粒、含有TR46基因突变DNA序列的质粒、含有L98H和Y121F基因突变DNA序列的质粒和含有T289A基因突变DNA序列的质粒的质量比为1:(0.5～1.5):(0.5～1.5):(0.5～1.5)，优选为1:1:1:1。