[发明专利]一种从菌包中提取木聚糖酶的方法

权利要求书

1.一种从菌包中提取木聚糖酶的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

a，菌包栽培废料粉碎混合均匀，按料液比1:5加入水和缓冲液的混合液，其中水和缓冲液比为1:4，混合均匀，20℃静置1.5h；采用纱布过滤，25℃下10000r/min离心10-15min，取上清酶液；

b，取上清酶液10mL，用30wt.%硫酸铵进行一次硫酸铵沉淀，70wt.%硫酸铵进行二次硫酸铵沉淀，10℃下盐析3-6h，20℃下10000r/min离心10-15min，收集沉淀；

c，置入缓冲液至沉淀完全溶解，取10ml溶解液，20℃下磁力搅拌器上透析；每隔1h更换一次透析液，直至向透析液中加入0.1mol/LBaCl2溶液，检测无白色沉淀产生为止；收集溶解液，25℃下10000r/min离心10-15min，取上清冷冻干燥，得到可溶蛋白，置入缓冲液至可溶蛋白完全溶解，25℃下10000r/min离心10-15min，取上清得到粗酶液；

d，缓冲液平衡SephadexG-100葡聚糖凝胶层析，流速为1mL/min，直至记录仪上的基准线值恒定，停止平衡；取粗酶液，用缓冲液洗脱，收集各洗脱峰，检测各管酶活，合并有酶活管，冷冻浓缩，得到木聚糖酶；

e，用三羟甲基氨基甲烷盐酸盐缓冲液平衡DEAEC-52，得到平衡缓冲液；用平衡缓冲液溶解经SephadexG-100葡聚糖凝胶层析后的酶液上柱，取3ml，采用含有氯化钠的浓度分别为0M、0.3M和0.7M的三羟甲基氨基甲烷盐酸盐平衡缓冲液进行盐离子梯度洗脱，收集各洗脱峰；检测各洗脱峰的酶活，收集，冷冻干燥，得到木聚糖酶。

2.如权利要求1所述的从菌包中提取木聚糖酶的方法，其特征在于，所述步骤a-d中的缓冲液为0.02MpH6.0磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液；步骤e所述的三羟甲基氨基甲烷盐酸盐缓冲液为0.02MpH7.0三羟甲基氨基甲烷盐酸盐平衡缓冲液。

3.如权利要求1所述的从菌包中提取木聚糖酶的方法，其特征在于，采用分离胶的浓度采用浓度为10%的聚丙烯酰胺、pH8.5三羟甲基氨基甲烷盐酸盐缓冲液，用考马斯亮蓝R-250进行染色，鉴定步骤d和步骤e得到的木聚糖酶的蛋白纯度。