[发明专利]一种紫杉醇代谢标志物的检测试剂盒及其检测方法和应用在审
| 申请号： | 202110671058.9 | 申请日： | 2021-06-17 |
| 公开（公告）号： | CN113584162A | 公开（公告）日： | 2021-11-02 |
| 发明（设计）人： | 刘丹;易倩春 | 申请（专利权）人： | 湖南菲思特精准医疗科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6886 | 分类号： | C12Q1/6886;C12Q1/6844;C12Q1/6869;C12N15/11 |
| 代理公司： | 湖南乔熹知识产权代理事务所(普通合伙) 43262 | 代理人： | 安曼 |
| 地址： | 410005 湖南省长沙市开福区沙坪街道中*** | 国省代码： | 湖南;43 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 紫杉醇 代谢 标志 检测 试剂盒 及其 方法 应用 | ||
1.一种紫杉醇代谢标志物的检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒用于检测紫杉醇代谢标志物CYP1B1 432C/G、ABCB1 C3435T两个基因的基因多态性，试剂盒包括如下组分：CYP1B1 432C/G扩增引物、CYP1B1 432C/G测序引物、ABCB1 C3435T扩增引物、ABCB1C3435T测序引物和阳性对照。
2.根据权利要求1所述的紫杉醇代谢标志物的检测试剂盒，其特征在于，所述CYP1B1432C/G扩增引物如序列表SEQ ID NO:1～2所示。
3.根据权利要求1所述的紫杉醇代谢标志物的检测试剂盒，其特征在于，所述ABCB1C3435T扩增引物如序列表SEQ ID NO:3～4所示。
4.根据权利要求1所述的紫杉醇代谢标志物的检测试剂盒，其特征在于，所述CYP1B1432C/G测序引物如序列表SEQ ID NO:5所示，ABCB1 C3435T测序引物如序列表SEQ ID NO:6所示。
5.根据权利要求1所述的紫杉醇代谢标志物的检测试剂盒，其特征在于，所述测序引物为琼脂糖凝胶颗粒与氨基标记的DNA序列的结合物。
6.根据权利要求1所述的紫杉醇代谢标志物的检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括扩增缓冲液、18mM醋酸镁、dNTPS、链置换DNA聚合酶、单链DNA结合蛋白、结合单链核酸的重组酶和海藻糖。
7.根据权利要求6所述的紫杉醇代谢标志物的检测试剂盒，其特征在于，所述所述试剂盒中各组分终浓度为：CYP1B1 432C/G扩增前后引物各0.32uM，ABCB1C3435T扩增前后引物各0.32uM，dNTPS 0.3mM，链置换DNA聚合酶1.2ng/μL，单链DNA结合蛋白3.2ng/μL，结合单链核酸的重组酶4.8ng/μL，海藻糖0.2％。
8.根据权利要求1所述的紫杉醇代谢标志物的检测试剂盒，其特征在于，所述阳性对照，包括浓度为20ng/ul的CYP1B1 432C/G、ABCB1 C3435T杂合型基因组DNA。
9.一种采用根据权利要求1～8任一项所述的紫杉醇代谢标志物的检测试剂盒的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括以下步骤：
a.将所述扩增反应液与5ul待测基因组DNA，采用多重RPA扩增进行扩增；
b.结合液(含微珠)与扩增产物进行结合；
c.变性液处理得到单链产物；
d.加入洗涤缓冲液漂洗；
e.向每个测序管中加入测序酶和测序底物；
f.取一个8排管，自圆滑一端向平端依次加入dATP、dTTP、dGTP、dCTP、CYP1B1(432C/G)测序引物、ABCB1(C3435T)测序引物、ddATP。将排管底部轻轻磕碰桌面，使得碱基平铺在排管底部；
g.焦磷酸测序；
h.确定CYP1B1(432C/G)位点、ABCB1(C3435T)位点紫杉醇位点的基因型。
10.一种根据权利要求1～8任一项所述的紫杉醇代谢标志物的检测试剂盒的应用，其特征在于，所述检测试剂盒用于体外检测待测样本中的CYP1B1 432C/G和ABCB1C3435T基因多态性。
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