[发明专利]一种活性和立体选择性提高的烯键还原酶突变体及其编码基因以及应用有效
| 申请号： | 202110674324.3 | 申请日： | 2021-06-17 |
| 公开（公告）号： | CN113481175B | 公开（公告）日： | 2023-07-14 |
| 发明（设计）人： | 林金萍;魏东芝;张宝琪;杜涵 | 申请（专利权）人： | 华东理工大学 |
| 主分类号： | C12N9/02 | 分类号： | C12N9/02;C12N15/53;C12N1/21;C12P41/00;C12P7/24;C12R1/19 |
| 代理公司： | 上海智信专利代理有限公司 31002 | 代理人： | 余永莉 |
| 地址： | 200237 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 活性 立体 选择性 提高 还原酶 突变体 及其 编码 基因 以及 应用 | ||
【权利要求书】：
1.一种活性和立体选择性提高的烯键还原酶突变体在催化柠檬醛制备(
第84位的酪氨酸Y突变为缬氨酸V的烯键还原酶突变体Y84V，氨基酸序列如SEQ IDNO.4所示；
第84位的酪氨酸Y突变为亮氨酸L的烯键还原酶突变体Y84L，氨基酸序列如SEQ IDNO.5所示；
第84位的酪氨酸Y突变为异亮氨酸I的烯键还原酶突变体Y84I，氨基酸序列如SEQIDNO.6所示。
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述应用包括：以含有烯键还原酶突变体Y84V编码基因的重组基因工程菌经发酵培养后离心获得的菌体、菌体固定化细胞、菌体超声破碎后提取的酶、固定化酶或者纯酶为催化剂，以柠檬醛为底物，以pH为7-9的缓冲液为反应介质，在20-40℃，150-300r/min条件下反应，反应结束后，将反应液分离纯化，获得(
3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，反应体系中，底物浓度为20-200mM，葡萄糖浓度为30-220mM，烯键还原酶用量以酶活计量为1-5U/mL，葡萄糖脱氢酶以酶活计量为1.5-7.5U/mL。
4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述反应进行中，根据pH变化，通过加入Na2CO3溶液调节pH至8.5。
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