[发明专利]猪肠道损伤的无损检测方法

权利要求书

1.一种猪肠道损伤的无损检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

S10、获取猪肠道的上皮细胞的标志基因villin以及猪肠道的中性粒细胞的标志基因elane；

S20、采取新鲜的猪粪便，并获取其中的基因组；

S30、将所述基因组分别与所述上皮细胞的标志基因villin及所述猪肠道的中性粒细胞的标志基因elane对照，以确定所述基因组中是否存在上皮细胞的标志基因villin和/或所述猪肠道的中性粒细胞的标志基因elane；

S40、若所述基因组中存在上皮细胞的标志基因villin和/或所述猪肠道的中性粒细胞的标志基因elane，则判定猪肠道有损伤。

2.如权利要求1所述的猪肠道损伤的无损检测方法，其特征在于，步骤S10包括：

S11、检测猪肠道的上皮细胞的标志基因villin，并设计第一引物对扩增所述猪肠道的上皮细胞的标志基因villin，将扩增得到的片段插入pMD18T载体中，得到质粒pMD18T-villin；

S12、检测猪肠道的中性粒细胞的标志基因elane，并设计第二引物对扩增所述中性粒细胞的标志基因elane，将扩增得到的片段插入pMD18T载体中，得到质粒pMD18T-elane。

3.如权利要求2所述的猪肠道损伤的无损检测方法，其特征在于，步骤S30包括：

S31、以所述基因组为模板，分别用所述第一引物对及所述第二引物对进行扩增，得到扩增基因，同时以pMD18T-villin和pMD18T-elane为模板进行扩增，作为阳性对照；

S32、分别对所述阳性对照及所述扩增基因进行电泳，得电泳图；

S33、根据所述电泳图，确定所述基因组中是否存在上皮细胞的标志基因villin和/或所述猪肠道的中性粒细胞的标志基因elane。

4.如权利要求2所述的猪肠道损伤的无损检测方法，其特征在于，

所述第一引物对包括上游引物P1和下游引物P2，所述第一引物对的核苷酸序列为：

上游引物P1：5’-TTGGCGCAACTGTTATTTCT-3’，

下游引物P2：5’-CCACTGGAGGGGGGTGCAGA-3’；和/或，

所述第二引物对包括上游引物P3和下游引物P4，所述第二引物对的核苷酸序列为：

上游引物P3：5’-GAGGAAGTGGGGGCACCT-3’，

下游引物P4：5’-TTCTACAAAACAGGGTT-3’。

5.如权利要求1所述的猪肠道损伤的无损检测方法，其特征在于，在步骤S40之后，所述猪肠道损伤的无损检测方法还包括：

S50、根据所述所述基因组中的基因，确定猪肠道损伤的类型。

6.如权利要求5所述的猪肠道损伤的无损检测方法，其特征在于，步骤S50包括：

S51、若所述基因组中同时存在上皮细胞的标志基因villin和中性粒细胞的标志基因elane，则猪肠道损伤为炎性损伤；

S52、若所述基因组中存在上皮细胞的标志基因villin，不存在中性粒细胞的标志基因elane，则猪肠道损伤为非炎性损伤。

7.如权利要求2所述的猪肠道损伤的无损检测方法，其特征在于，在步骤S40之后，所述猪肠道损伤的无损检测方法还包括：

S60、根据所述基因组的定量荧光PCR的Ct值，确定猪肠道损伤的程度。

8.如权利要求7所述的猪肠道损伤的无损检测方法，其特征在于，步骤S60包括：

S61、以质粒pMD18T-villin为阳性对照，以所述基因组为模板，分别用第三引物对及第四引物对进行定量荧光PCR，并检测上皮细胞的标志基因villin的Ct值a；

S62、若a20，则判定肠道严重损伤，若21≦a≦30，则判定中等程度损伤，若31≦a≦40，则判定轻微程度损伤，若a40，则判定无损伤。