[发明专利]猪肠道损伤的无损检测方法

说明书

本发明公开一种猪肠道损伤的无损检测方法，涉及检测技术领域。猪肠道损伤的无损检测方法包括以下步骤：S10、获取猪肠道的上皮细胞的标志基因villin以及猪肠道的中性粒细胞的标志基因elane；S20、采取新鲜的猪粪便，并获取其中的基因组；S30、将基因组分别与所述上皮细胞的标志基因villin及猪肠道的中性粒细胞的标志基因elane对照，以确定基因组中是否存在上皮细胞的标志基因villin和/或猪肠道的中性粒细胞的标志基因elane；S40、若基因组中存在上皮细胞的标志基因villin和/或猪肠道的中性粒细胞的标志基因elane，则判定猪肠道有损伤。本发明的猪肠道损伤的无损检测方法，降低了现有检测技术的难度与成本，达到了无损化检测，简单准确。

技术领域

本发明涉及检测技术领域，特别涉及一种猪肠道损伤的无损检测方法。

背景技术

肠道不仅是动物消化吸收营养物质的最终场所，也是动物机体内最大的免疫器官，所以保障动物生产的重要条件之一就是维护动物肠道健康。同时，动物肠道作为机体应激反应的中心器官，在养猪生产过程中，众多因素会致使肠道损伤与功能紊乱。肠道黏膜的完整性是保障肠道功能的生理基础，黏膜受损会导致肠道菌群失调，引起炎症反应和组织损伤，降低生产性能，甚至危害仔猪健康。

如何检测及防控肠道损伤已经成为了当前的热门话题，目前尽管已有通过肠道解剖临床症状及黏膜形态结构显微观察，或通过血液和组织样本中相关基因、蛋白质表达量等分子生物学检测分析的方法来评价肠道损伤情况，但现有的检测分析方法操作繁琐、过程复杂、专业水平要求过高、耗时费力成本高，很难实现迅速、安全、稳定、可靠地检测及评价肠道损伤情况。

发明内容

本发明的主要目的是提出一种猪肠道损伤的无损检测方法，旨在解决现有猪肠道损伤检测过程复杂的问题。

为实现上述目的，本发明提出一种猪肠道损伤的无损检测方法，包括以下步骤：

S10、获取猪肠道的上皮细胞的标志基因villin以及猪肠道的中性粒细胞的标志基因elane；

S20、采取新鲜的猪粪便，并获取其中的基因组；

S30、将所述基因组分别与所述上皮细胞的标志基因villin及所述猪肠道的中性粒细胞的标志基因elane对照，以确定所述基因组中是否存在上皮细胞的标志基因villin和/或所述猪肠道的中性粒细胞的标志基因elane；

S40、若所述基因组中存在上皮细胞的标志基因villin和/或所述猪肠道的中性粒细胞的标志基因elane，则判定猪肠道有损伤。

可选地，步骤S10包括：

S11、检测猪肠道的上皮细胞的标志基因villin，并设计第一引物对扩增所述猪肠道的上皮细胞的标志基因villin，将扩增得到的片段插入pMD18T载体中，得到质粒pMD18T-villin；

S12、检测猪肠道的中性粒细胞的标志基因elane，并设计第二引物对扩增所述中性粒细胞的标志基因elane，将扩增得到的片段插入pMD18T载体中，得到质粒pMD18T-elane。

可选地，步骤S30包括：

S31、以所述基因组为模板，分别用所述第一引物对及所述第二引物对进行扩增，得到扩增基因，同时以pMD18T-villin和pMD18T-elane为模板进行扩增，作为阳性对照；

S32、分别对所述阳性对照及所述扩增基因进行电泳，得电泳图；

S33、根据所述电泳图，确定所述基因组中是否存在上皮细胞的标志基因villin和/或所述猪肠道的中性粒细胞的标志基因elane。

可选地，

所述第一引物对包括上游引物P1和下游引物P2，所述第一引物对的核苷酸序列为：