[发明专利]一种产生广谱交叉中和活性的重组新型冠状病毒RBD三聚体蛋白疫苗、其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种针对多种新型冠状病毒(SARS‑CoV‑2)流行株同时产生交叉中和活性的重组RBD三聚体蛋白，所述三聚体蛋白是由三个新型冠状病毒S蛋白RBD区域的亚基组成，所述三个新型冠状病毒RBD区域的氨基酸序列相同或至少一个不同；当所述三个新型冠状病毒RBD区域的氨基酸序列相同时，所述氨基酸序列为如SEQ ID No.2或SEQ ID No.3所示的氨基酸序列，或与其具有95％以上同源性的序列。以RBD三聚体蛋白为抗原，辅以佐剂后，免疫机体，可同时产生针对多种新型冠状病毒流行株的高滴度中和性抗体，具有一定广谱性，可以用于治疗和/或预防新型冠状病毒感染和/或新型冠状病毒疾病。

技术领域

本发明涉及生物医药领域，特别涉及一种产生广谱交叉中和活性的重组新型冠状病毒RBD三聚体蛋白疫苗、其制备方法和应用。

背景技术

新型冠状病毒(SARS-CoV-2)，属巢病毒目(Nidovirales)、冠状病毒科(Coronaviridae)、正冠状病毒亚科、Betacoronavirus属、Sarbecovirus亚属、类SARS病毒种、单股正链RNA病毒，有包膜，基因组全长约为29.9kb，绝大部分编码非结构蛋白，参与病毒复制和翻译等功能，少部分序列编码结构蛋白，如：S蛋白(spike protein，)、M蛋白(membrane protein)、E蛋白(envelope protein)和N蛋白(nucleo protein)。此外，还有若干附属蛋白：3a,3b,p6,7a,7b,8b,9b和orf14，这些蛋白均参与病毒组装。S、M和E蛋白构成病毒囊膜，是病毒引起免疫反应的主要表面抗原。其中S蛋白是一种跨膜糖蛋白，分子量约为150kDa，在病毒表面形成突出的同源三聚体。S由两个功能亚基组成，在S1和S2亚基之间的边界处(S1/S2裂解点)被切割，这两个亚基在融合前构象中保持非共价结合。S2亚基也由多个结构域构成，它的功能主要是介导病毒与宿主细胞的融合。远端S1亚基在结构上分为四个不同的结构域：N端结构域(NTD)、受体结合结构域(RBD)、C端结构域1(CTD1)和C端结构域2(CTD2)，其中RBD主要负责与宿主细胞表面的受体血管紧张素转换酶2(angiotensinconverting enzyme 2,ACE2)结合，从而介导病毒侵染宿主细胞，因此S蛋白及RBD均为目前基因工程疫苗研发的主要靶标。

截至目前，全球获批上市的疫苗共有8款，分别是美国批准紧急使用授权(EUA)的BNT162b2和mRNA-1273，英国批准紧急使用授权(EUA)的AZD1222，中国国药中生(北京公司和武汉公司)和北京科兴的3款新冠灭活疫苗、康希诺生物腺病毒载体疫苗以及智飞生物重组蛋白疫苗，以及俄罗斯批准上市的“卫星V”，另外还有数十种疫苗处于临床研究不同阶段。这些已上市的疫苗无论是来自哪种技术路线，都对疫情防控做出了不同程度的贡献，然而由于新冠病毒的进化，不断出现各种突变，使现有疫苗的保护效果受到不同程度的影响。

新冠病毒属于RNA病毒，较易发生突变，全球已经报道了30000多个新冠病毒突变株，主要突变株包括：Alpha(B.1.1.7)突变株、Beta(B.1.351)突变株、Gamma(P1)突变株、Epsilon(B.1.429)突变株、Delta(B.1.617.2)，Kappa(B.1.617.1)突变株。这些突变株的突变位点主要存在于S蛋白的氨基酸序列，尤其是RBD区。因此，突变可能会提高病毒与ACE2受体的亲和力、减弱中和抗体效应，从而增强病毒毒力和传染力，加速病毒逃逸，降低疫苗保护效果。因此，开发一种针对多种新冠病毒流行株的广谱性疫苗已成为当务之急。

发明内容

本发明针对现有技术中缺少广谱新型冠状病毒疫苗(SARS-CoV-2)的技术缺陷，提供了一种能够对多种新型冠状病毒流行株，同时产生良好交叉中和活性的单组分广谱重组RBD三聚体蛋白疫苗。

本发明提供的技术方案为：

一种产生广谱交叉中和活性的重组新型冠状病毒RBD三聚体蛋白，所述三聚体蛋白是由三个新型冠状病毒RBD区域的亚基组成，所述三个新型冠状病毒RBD区域的氨基酸序列相同或至少一个不同；