[发明专利]一种柠条锦鸡儿离体再生方法

权利要求书

1.一种柠条锦鸡儿离体再生方法，其包括如下步骤：

（1）无菌苗的制备：将消毒的柠条锦鸡儿种子接种至MS培养基中进行培养；

（2）不定芽诱导预培养：选取（1）中培养4-10 d的无菌苗，切取胚尖接种至不定芽诱导预培养培养基上，所述不定芽诱导预培养培养基是在基本培养基中添加6-苄氨基嘌呤0.1-1 mg/L和萘乙酸0.01-0.1 mg/L，光下培养7-25 d；

（3）不定芽诱导培养：将第（2）步预培养后获得胚尖转接至不定芽诱导培养基进行培养，所述不定芽诱导培养基是在基本培养基中添加6-苄氨基嘌呤1-6 mg/L，培养至诱导出不定芽；

（4）不定芽伸长培养：将第（3）步中诱导出带有基座的丛生芽，接种至不定芽伸长诱导培养基，所述不定芽伸长培养基是在基本培养基添加0.1-2mg/L 6-苄氨基嘌呤与0.01-0.2mg/L 萘乙酸；培养20-35 d，发现丛芽有明显生长的趋势；

（5）生根培养：将第（4）步继代培养伸长的丛芽分成单株，接种至生根培养基中，进行生根诱导；

所述的基本培养基以MS培养基的大量元素、MS培养基的微量元素、B5培养的有机成分作为基本培养基；

其中，第（1）至（4）中采用的培养基中添加蔗糖30g/L，肌醇0.1g/L，琼脂粉5.5 g/L，调节培养基pH值为5.8；培养条件为20-25℃，光照强度2000-3000lx，光照12h/d。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，第（1）步骤的具体操作：挑选颗粒饱满、无虫眼、无黑色斑点的柠条种子，消毒接种至MS培养基中。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，第（2）步骤具体操作：选取（1）中培养7 d的无菌苗，用解剖刀切取2 mm左右胚尖，接种至不定芽诱导预培养培养基上。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，第（3）步中进行继代培养1或2次。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，第（4）步继代培养2-4次，得到伸长的芽苗。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述第（5）步中，所述生根培养基以MS培养基作为基本培养基，并添加萘乙酸0.1-1.5mg/L，于光下培养时间为30-40 d。

7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，进一步还包括下述步骤，即（6）炼苗：将第（5）步获得的已生根再生苗，挑选长势健壮的瓶苗进行炼苗；所述炼苗方法为：将培养瓶盖打开，注入0.5-1cm清水，置于室温、自然光照下，静置2-3天，将瓶苗掏出，将基部附着的培养基洗净，准备移栽。

8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，进一步还包括下述步骤，即（7）移栽：将炼苗后的再生苗进行移栽。

9.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述第（2）步中，在基本培养基中6-苄氨基嘌呤添加量为0.4-0.6 mg/L、萘乙酸为0.04-0.06 mg/L，光下培养10-20 d。

10.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述第（3）步中，在基本培养基中6-苄氨基嘌呤添加量为3 mg/L，培养时间为25d。

11.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述第（4）步中，在基本培养基中6-苄氨基嘌呤添加量为0.8-1.2 mg/L，萘乙酸添加量为0.05-0.1 mg/L。

12.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述消毒的方式具体为：先用洗洁精清洗3min，75%酒精棉花包裹擦拭种子，进入超净台后75%回收酒精过一下，再用75%酒精消毒2min，最后用10% 次氯酸钠消毒20 min。

13.如权利要求8所述的方法，其特征在于，所述移栽具体操作如下：移栽基质为泥炭土：珍珠岩：蛭石=3：1：1，移栽前将基质连盆浸入水中使其完全润湿，移栽后套袋保湿，湿度不够时使用喷壶喷洒植株表面，待苗生长强健后除去套袋，正常养护。