[发明专利]一种敲除H3L基因的重组痘苗病毒载体

说明书

本发明涉及分子生物学和免疫学技术领域，具体涉及一种敲除H3L基因的重组痘苗病毒载体；重组痘苗病毒载体带有H3L同源重组臂序列，重组病毒载体为用来构建在痘苗病毒H3L基因区域内插入外源基因的痘苗病毒载体；本发明提供了一种可以逃逸体内存在的既有抗痘苗病毒中和抗体的重组痘苗病毒载体，重组痘苗载体的H3L编码基因被敲除或破坏，不能正常表达H3L基因，该痘苗病毒载体可以作为肿瘤疫苗或基因治疗载体，可以用于预防或治疗多种肿瘤。

技术领域

本发明涉及分子生物学和免疫学技术领域，具体涉及一种敲除H3L基因的重组痘苗病毒载体。

背景技术

痘苗病毒(Vaccinia Virus)属于痘病毒科正粘病毒属，曾被用作预防天花感染的疫苗而在世界范围内得到广泛应用，使得天花成为第一个被人类完全灭绝的恶性传染病(Riva，G.et al.，1979.A milestone in the history of mankind.Eradication ofsmallpox.MMW Munch Med Wochenschr，121(50)，1669-70)。近二十年来，随着基因工程技术的快速发展，痘苗病毒被用于研究设计基因表达载体，或用于重组活病毒疫苗的研究(Moss，B.1996.Genetically engineeredpoxviruses for recombinant geneexpression，vaccination，and safety.ProcNatl Acad Sci USA 93(21)，11341-8；Paoletti，E.et al.，1996.Applications ofpox virus vectors to vaccination：anupdate.Proc Natl Acad Sci USA 93(21)，11349-53)。已有多种重组痘苗病毒疫苗可以成功地表达狂犬病毒、日本脑炎病毒等病毒的抗原并用于动物传染病的防治(Kieny，M.P.etal.，1984.Expressionof rabies virus glycoprotein from a recombinant vacciniavirus.Nature312(5990)，163-6；Konishi，E.et al.，1992.A highly attenuatedhostrange-restricted vaccinia virus strain，NYVAC，encoding the prM，E，andNS1genes of Japanese encephalitis virus prevents JEV viremia inswine.Virology190(1)，454-8)。人用重组活病毒疫苗也取得许多重要进展，已有包括麻疹、EBV、HAV、HBV、HPV、HIV及狂犬病毒等进行了初步的人体免疫观察(郭斐等，2001，非复制重组痘苗病毒天坛株C-K缺失区表达载体的构建及重组病毒生物学性状的研究。病毒学报17(1)，24-28；McMichael，A.et al.，2002.The quest for anAIDS vaccine：is the CD8+T-cell approach feasible？Nat Rev Immunol 2(4)，283-91；Moss，B.1996.Geneticallyengineered poxviruses for recombinantgene expression，vaccination，andsafety.Proc Natl Acad Sci USA 93(21)，11341-8；Zhu，J.H.et at.，1996.Immunogenicity and relative attenuation ofdifferent vaccinia-rabiesvirus recombinants.Arch Virol 141(6)，1055-65)。

痘苗病毒天坛株是中国特有的痘苗病毒毒株，曾作为预防天花传染的疫苗株在中国大量人群中长期使用过，具有相对毒力较弱、使用安全的特点，是研制适用于中国应用的基因工程病毒载体和重组活疫苗的理想毒株。中国痘苗病毒天坛株的全基因组测序于1997年完成，它为研究和阐明痘苗病毒天坛株独特的生物学特性及进行基因工程改造提供了重要的背景资料(金奇等，1997，痘苗病毒天坛株全基因组结构特点的分析。中国科学(C辑)27(6)，562-567)。