[发明专利]一种利用SSR分子标记法鉴定青稞品种的方法及其用途

权利要求书

1. 一种SSR引物，其特征在于，所述SSR引物由Seq ID No.3和Seq ID No.4，Seq IDNo.7和Seq ID No.8，Seq ID No.11和Seq ID No.12，Seq ID No.25和Seq ID No.26，SeqID No.29和Seq ID No.30，和Seq ID No.33和Seq ID No.34所示的序列组成。

2.一种利用SSR分子标记法鉴定青稞品种的方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）提取青稞品种样品的DNA；

（2）用权利要求1所述SSR引物进行PCR扩增、变性聚丙烯酰胺凝胶电泳及银染、毛细管电泳；

所述样品选自青稞籽粒、胚、胚芽、幼苗、叶片中的一种或几种；

所述青稞品种为甘青7号、甘青6号、甘青5号、黄青2号、甘青4号、阿青6号、阿青5号、藏青13号、昆仑14号、岩石稞、藏青690、昆仑15号、藏青320、喜马拉雅19号、云稞1号、龙稞4号、康青8号、喜马拉雅22号、康青9号、肚里黄、龙稞5号、藏青2000、甘青2号或云稞4号。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述PCR扩增的反应程序为：

94℃预变性4.5~5.5min；94℃变性25~35s，50~65℃退火55~65s，72℃延伸25~35s，10~15个循环，每循环降0.5~1.2℃；94℃变性25~35s，50℃退火40~50s，72℃延伸25~35s，20~25个循环；72℃延伸9~12 min。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的具体步骤包括：

(a)取6％变性聚丙烯酰胺溶液、四甲基乙二胺、10％过硫酸胺，混匀，制胶；

(b) 将PCR扩增产物与加样缓冲液混匀，变性后冷却，进行电泳。

5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述变性的条件为92~98℃变性4.5~5.5min；

所述电泳的条件为恒定功率60~80W，电泳时间1.5~2.5h；

所述电泳时，凝胶的温度为45~55℃。

6.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述银染的步骤包括：将凝胶固定后水洗，银染15~20min后再水洗，显色至条带清晰后定影；

所述固定的条件为20~35 rpm固定15~25 min；

所述水洗的时间≤10s/次；所述定影时间为4.5~5.5min。

7.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述毛细管电泳的具体步骤包括：取等体积同一组合引物的不同荧光标记的扩增产物，混匀，得到混合液，吸取混合液、分子量内标和去离子甲酰胺加入到96孔板上，变性、冷却、离心，电泳；

所述内标的用量为0.05~0.15μL；

所述去离子甲酰胺的用量为8~9.5μL；

所述变性的条件为90~100 ℃，3~7min。

8.权利要求1所述引物在青稞品种鉴定中的用途；

所述青稞品种为甘青7号、甘青6号、甘青5号、黄青2号、甘青4号、阿青6号、阿青5号、藏青13号、昆仑14号、岩石稞、藏青690、昆仑15号、藏青320、喜马拉雅19号、云稞1号、龙稞4号、康青8号、喜马拉雅22号、康青9号、肚里黄、龙稞5号、藏青2000、甘青2号或云稞4号。

9.权利要求1所述引物在青稞品种的遗传亲缘关系的分析中的用途；

所述青稞品种为甘青7号、甘青6号、甘青5号、黄青2号、甘青4号、阿青6号、阿青5号、藏青13号、昆仑14号、岩石稞、藏青690、昆仑15号、藏青320、喜马拉雅19号、云稞1号、龙稞4号、康青8号、喜马拉雅22号、康青9号、肚里黄、龙稞5号、藏青2000、甘青2号或云稞4号。