[发明专利]一种利用SSR分子标记法鉴定青稞品种的方法及其用途

说明书

本发明公开了一种利用SSR分子标记法鉴定青稞品种的方法及其用途，所述SSR分子标记法中的引物序列为Bmag0745、Bmag0496、Bmag0353、Scssr03381、AWBMS0080、GBM1215、Bmag0919、GBM1008、Scssr03907、HVPLASCIB、HVCH126A、GBM1516、Scssr03906、GBM1440、Scssr04163、GBM1413、HVM33、EBmac0415对应的引物中的一个或几个，本申请通过筛选的18对SSR引物进行变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)和毛细管电泳2种检测方法，可以更好的区分青稞品种；其中引物Bmag0496、Scssr03381、GBM1215、Scssr03906、Scssr04163、HVM33可用于24份青稞主栽品种扩增SSR分析的品种聚类图。本发明提供的SSR引物具有特异性强、扩增结果稳定、多态性高等特征，这些分子标记可应用于品种鉴定、基因定位、分子鉴定等相关领域。

技术领域

本发明属于分子生物学领域，具体涉及一种利用SSR分子标记法鉴定青稞品种的方法及其用途。

背景技术

青稞(Hordeum vulgare L.var.nudum Hook.f.)属禾本科小麦族大麦亚族大麦属，在植物学上属于栽培大麦的变种，是我国的原产农作物之一，是青藏高原最具特色的农作物，是青藏高原极端环境条件下植物适应性进化的典型代表，具有耐旱、耐瘠薄、生育期短、适应性强、产量稳定、易栽培等优异种性，种质资源十分丰富。

青稞具有高蛋白、高可溶性纤维、高维生素和低糖低脂的特点，同时含有人体必需的锌、钙、铁、硒等微量元素，营养成分全面，结构合理，所含的大量膳食纤维具有清肠通便，清除体内毒素的良好功效，是谷类作物中的佳品。青藏高原的藏民同胞所吃的糌粑和酥油炒面都以青稞为主要原料。青稞籽粒中所含的β-葡聚糖(平均含量为6.57％～8.6％)是青稞特有生理功能元素，对治疗人类多种疾病具有特殊疗效。由于青稞在食品、保健、饲用和酿造业中的重要性，且种质资源丰富，品种多样，因此，如何全面细致地了解青稞种质资源的遗传多样性，较高效率地利用青稞种质资源，对育成优良专用型青稞新品种十分关键。

分子标记能在DNA水平上反映植物遗传基础的差异，是植物遗传育种领域内的一项新兴技术。简单重复序列(SSR)在整个基因组中分布广泛，同一类型的微卫星序列由于重复次数或重复程度的差异，从而在每个座位上产生多态性。SSR分子标记由于具有高的多态信息含量，呈共显性遗传，近年来被广泛应用于各种大麦(青稞)的品种鉴定的研究。

发明内容

本发明主要解决的技术问题是提供一种利用SSR分子标记法鉴定青稞品种的方法及其用途，所述分子标记中提供的SSR引物具有特异性强、扩增结果稳定、多态性高等特征，这些分子标记可应用于品种鉴定、基因定位、分子鉴定等相关领域。

SSR分布于青稞基因组的不同位置上，不同品种每个位点上重复单位的数目及序列可能不同。由于每个简单重复序列两侧的序列是高度保守和单拷贝的，因而可以根据其两侧的序列设计一对特异引物，利用PCR技术对两条引物间的DNA序列进行扩增。在电泳过程中，得到的PCR产物在电场作用下，由于分子量大小不同得到分离，经硝酸银染色或者荧光染料标记加以区分。因此，根据SSR位点的多态性，利用PCR扩增和电泳技术可以鉴定青稞品种。

青稞因其籽粒内外稃与颖果分离，籽粒裸露，故称裸大麦，与大麦的基因组相似，但两者也存在众多序列差异，发明人经过试验研究发现，大麦标准中大多数引物，如引物Bmac0064、Bmag0603、Bmac0181，利用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检(PAGE)测青稞，引物多态性较差，大麦引物Scssr15846、Bmag0877在青稞中发现多态性较好但是利用毛细管电泳荧光检测出现特异性不好或者峰值较低的问题。因此，开发一种多态性高、特异性强的SSR引物对鉴定青稞品种具有重大意义。

为了解决上述问题，本发明采用的技术方案是：