[发明专利]一种靶向FOLR1和HER2双打靶点CAR T的制备及应用

说明书

本发明提供了一种可以靶向于FOLR1和HER2双靶点的嵌合抗原受体CAR‑免疫细胞及其应用。本发明的CAR T细胞的应用可以覆盖更广范围的卵巢癌肿瘤患者。本发明的CAR T细胞在传统CAR T基础上进行结构优化，使其分泌BiTE，可以实现对双靶点的杀伤；同时能更大程度的调动回输的T细胞参与免疫治疗，从而实现对肿瘤细胞的高效杀伤。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种靶向FOLR1和HER2双打靶点CAR T的制备及应用。

背景技术

卵巢癌是女性癌症死亡的主要原因之一，据报道，2020年全球女性卵巢癌新发病例313959例(中国55342例)，死亡207252例(中国37519例)。由于目前尚没有有效的筛查手段来预防或者筛查卵巢癌，所以卵巢癌患者确诊时70％为卵巢癌晚期，患者总体生存率只有40％左右。

CAR T，全称是Chimeric Antigen Receptor T-Cell Immunotherapy，嵌合抗原受体T细胞免疫疗法。近几年其在急性白血病和非霍奇金淋巴瘤的治疗上有着显著的疗效，被认为是最有前景的肿瘤免疫治疗方式之一。CAR T细胞疗法首先从患者体内收集细胞，然后通过激活和基因工程对其进行修饰，使得T细胞表面表达嵌合抗原受体(Chimeric AntigenReceptor，CAR)。嵌合抗原受体是由胞外抗原结合区即识别肿瘤相关抗原的scFv、跨膜区和胞内信号域等组成。当CAR T细胞回输到患者体内，可以识别和消灭表达指定抗原的肿瘤细胞。

叶酸受体1(Folate receptor1，FOLR1)又名叶酸受体α或叶酸结合蛋白，相较于肿瘤组织，其在正常组织上表达较低。研究显示，FOLR1在大多数的卵巢癌(在恶性卵巢癌中的表达占76％)及子宫癌、子宫内膜癌、胰腺癌、肾癌、肺癌及乳腺癌中高表达，它可介导细胞摄取叶酸或产生调控信号来促进肿瘤细胞生长。FOLR1的这种表达模式使其成为适用于CART细胞治疗卵巢癌的一个良好的靶点。

卵巢恶性肿瘤中以上皮癌最多见(约占90％)，上皮性卵巢癌死亡率占各类妇科肿瘤的首位，对女性生命造成严重威胁。人表皮生长因子受体2(Human epidermal growthfactor receptor 2，HER2)的过量表达和许多上皮细胞癌症的恶化程度密切相关。HER2的过度表达具有抑制细胞凋亡、诱导血管和淋巴管新生、增强肿瘤细胞增殖及侵润转移的作用。研究发现在多种恶性肿瘤组织中存在HER2蛋白高表达，其中包括30％乳腺癌，35％～45％胰腺癌和30％～80％食管腺癌和鳞状细胞癌，它在正常卵巢上皮中表达较低，而在上皮性卵巢癌的表达率很高(11％～66％)，且大多数研究表明HER2蛋白表达与卵巢癌的不良预后有关，也与肿瘤对化疗、生物治疗的敏感性相关，因此它是卵巢癌免疫治疗研究的一个重要靶分子。

由于实体肿瘤的异质性程度高，使用上述单一靶点并不能完全实现对癌细胞的清除。若制备靶向上述FOLR1与HER2两个靶点的双特异性CAR T，能覆盖杀伤更多肿瘤细胞。然而，由于现行的基因修饰方法限制，制备CAR T的转导率并不是100％，其中未装载CAR基因的T细胞，回输之后和患者体内存在的大量普通T细胞一样，只能作为旁观者，缺乏对肿瘤靶点的特异识别能力。若能将这些旁观者T细胞激活调动起来，一起参与到肿瘤免疫治疗中，将极大的增强CAR T细胞的抗肿瘤效果。

因此，本领域迫切需要开发出一种能高效被修饰的、较大限度调动回输细胞中的T细胞、更加广谱的双特异性的CAR T细胞。

发明内容

本发明的目的就是提供一种能够高效被修饰的、较大限度被调动回输的、更加广谱的双特异性的CAR T细胞。

在本发明的第一方面，提供了一种嵌合抗原受体CAR-免疫细胞，所述CAR-免疫细胞含有以下元件：

(a)第一CAR，所述的第一CAR的胞外结合域含有靶向第一靶蛋白的第一结合元件，并且所述的第一CAR的胞外结合域含有或不含有靶向第二靶蛋白的第二结合元件；