[发明专利]可选择性靶向脑钠肽的聚合物及应用

说明书

本发明公开了一种可选择性靶向脑钠肽的聚合物及应用。本发明基于仿生分子设计策略，结合计算模拟、粗粒化模型和高通量筛选技术，设计合成可选择性靶向脑钠肽的聚合物，并研究其在BNP快速检测中的应用。本发明得到的聚合物具有较高的亲和力和良好的选择性，可以代替生物抗体应用于血清中脑钠肽BNP的富集和检测；该聚合物是由化学方法制备的，具有较高的稳定性、较长的使用寿命和较强的抗恶劣环境的能力，克服了传统生物抗体制备周期长、易失活、成本高、具有免疫原性等缺点。本发明的纳米聚合物物直接合成在96孔板内，在15min内即可实现血清样本中BNP的定量检测；将其制成荧光试纸条可实现BNP的可视化检测。

技术领域

本发明属于生物检测技术领域，特别涉及一种可选择性靶向脑钠肽的聚合物及应用。

背景技术

心衰，是指由于心脏的收缩功能和(或)舒张功能发生障碍，不能将静脉回心血量充分排出心脏，导致静脉系统血液淤积，动脉系统血液灌注不足，从而引起心脏循环障碍症候群，此种障碍症候群集中表现为肺淤血、腔静脉淤血。心力衰竭并不是一个独立的疾病，而是心脏疾病发展的终末阶段。采用B型脑钠肽(BNP)快速诊断试剂，可作为心力衰竭快速的辅助诊断，被越来越多的应用。

在临床工作中，血清BNP小于100pg/mL，是正常范围。而大于两倍以上，就会提示有心衰的情况。但由于血清样本成分复杂，目前真实样本中低丰度BNP的检测存在成本高、检测难度高、检测时间长等缺点。

发明内容

本发明目的在于克服由天然抗体及单克隆抗体为核心的检测技术中存在的成本高、制备效率低、筛选周期长、易变性难保存、具有免疫原性等缺点，基于仿生分子设计策略，结合计算模拟、粗粒化模型和高通量筛选技术，设计合成可选择性靶向脑钠肽的聚合物，并研究其在BNP快速检测中的应用。

本发明所述的可选择性靶向脑钠肽的聚合物的制备方法为：配制N-异丙基丙烯酰胺、N-叔丁基丙烯酰胺、带电功能单体、荧光量子点、十二烷基磺酸钠和交联剂的混合反应液，将反应液倒入96孔板中，通入氮气后加入引发剂溶液，密封后进行聚合反应，反应完成后除去96孔板上的溶液，黏附在96孔板底部的即为可选择性靶向脑钠肽的聚合物。

一种脑钠肽的荧光检测试纸条的制备方法：配制N-异丙基丙烯酰胺、N-叔丁基丙烯酰胺、带电功能单体、荧光量子点、十二烷基磺酸钠和交联剂的混合反应液，通入氮气排出空气后加入引发剂溶液，密封后进行聚合反应，反应完成后透析得到聚合物溶液，将聚合物溶液和荧光二氧化硅颗粒混合，然后倾倒在硝酸纤维素膜上进行抽滤，滤膜干燥后即得到脑钠肽的荧光检测试纸条。

所述带电功能单体选自丙烯酸、甲基丙烯酸、乙烯基磺酸钠、N-(3-氨基丙基)甲基丙烯酰胺、(3-丙烯酰胺丙基)三甲基氯化铵、1-乙烯基咪唑、N-(3-二甲氨基丙基)丙烯酰胺、4-乙烯基苯硼酸、N-(2-氨基乙基)丙烯酰胺中的一种或几种。

所述的混合反应液中N-异丙基丙烯酰胺、N-叔丁基丙烯酰胺、带电功能单体、交联剂的摩尔比范围为30-70:20-50:5-20:2-4。

所述的交联剂为N,N’-亚甲基双丙烯酰胺；十二烷基磺酸钠的添加量为0.02-0.2mg/mL。

所述的聚合反应为自由基聚合，聚合反应温度为45-65℃，聚合反应时间为12-15h。

所述的引发剂溶液为过硫酸铵溶液、或过硫酸铵和四甲基乙二胺的混合溶液。

所述的荧光量子点为荧光碳量子点，添加量为0.005-0.01mol/L。

所述的可选择性靶向脑钠肽的聚合物检测脑钠肽的方法为：向可选择性靶向脑钠肽的聚合物上滴加血清样本，待反应3-8min后，使用酶标仪测定聚合物在420nm处的荧光强度值，根据测得的荧光强度值和利用已知浓度的样品所测定的标准曲线对血清样本中的BNP进行定量计算。