[发明专利]一种检测新型冠状病毒的RT-PCR试剂盒

权利要求书

1.一种检测新型冠状病毒的RT-PCR试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含2019-nCoVRT-PCR检测反应液，所述2019-nCoV RT-PCR检测反应液包含ORF1ab基因、N基因和RNase P基因的特异性引物；所述ORF1ab基因的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示；所述N基因的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示；所述RNase P基因的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:6所示。

2.根据权利要求1所述的一种检测新型冠状病毒的RT-PCR试剂盒，其特征在于，所述2019-nCoV RT-PCR检测反应液还包含ORF1ab基因、N基因和RNase P基因的探针，所述ORF1ab基因的探针核苷酸序列如SEQ ID NO:7所示，所述N基因的探针核苷酸序列如SEQ IDNO:8所示，所述RNase P基因的探针核苷酸序列如SEQ ID NO:9所示。

3.根据权利要求2所述的一种检测新型冠状病毒的RT-PCR试剂盒，其特征在于，所述ORF1ab基因探针的5’修饰为FAM，3’修饰为BHQ1；所述N基因探针的5’修饰为HEX，3’修饰为BHQ1；所述RNase P基因探针的5’修饰为Cy5，3’修饰为BHQ3。

4.根据权利要求1所述的一种检测新型冠状病毒的RT-PCR试剂盒，其特征在于，所述2019-nCoV RT-PCR检测反应液还包括Buffer、RNase Free dH2O，所述试剂盒还包括RT-PCR酶、2019-nCoV阳性对照品、2019-nCoV阴性对照品、2019-nCoV样本核酸释放剂A液和2019-nCoV样本核酸释放剂B液。

5.根据权利要求4所述的一种检测新型冠状病毒的RT-PCR试剂盒，其特征在于，所述RT-PCR酶为Taq酶和反转录酶。

6.根据权利要求4所述的一种检测新型冠状病毒的RT-PCR试剂盒，其特征在于，所述2019-nCoV阳性对照品为浓度为106copies/mL的2019-nCoV-CDC阳性质粒，所述2019-nCoV阴性对照品为RNase Free dH2O，所述2019-nCoV样本核酸释放剂A液由氢氧化钠，曲拉通X-100，Tris-HCl，乙基苯基聚乙二醇，吐温20，氯化钠，氯化钾，蛋白酶K，十二烷基硫酸锂制备而成，所述2019-nCoV样本核酸释放剂B液由曲拉通X-100，Tris-HCl，吐温20，乙基苯基聚乙二醇，氯化钠，氯化钾制备而成。

7.根据权利要求5所述的一种检测新型冠状病毒的RT-PCR试剂盒，其特征在于，所述试剂盒的反应体系为：

8.根据权利要求1-7任一项所述的一种检测新型冠状病毒的RT-PCR试剂盒，其特征在于，所述试剂盒的反应条件如下：

反转录：42℃5min,1个循环；

预变性：95℃10sec，1个循环；

PCR：95℃5sec：60.8℃20sec，共40个循环，在每次60.8℃结束后收集荧光。

9.根据权利要求1-7任一项所述的一种检测新型冠状病毒的RT-PCR试剂盒，其特征在于，所述试剂盒检测的样本为经56℃、30min灭活的病毒样本。

10.根据权利要求9所述的一种检测新型冠状病毒的RT-PCR试剂盒，其特征在于，所述试剂盒待测样本的提取方法如下：

1)将病毒灭活的样本和2019-nCoV样本核酸释放剂A液在RNase free collectiontube中于65℃放置5min；

2)加入核酸释放剂B液，振荡5～10sec，25℃放置10min得到待测样本混合液。