[发明专利]一种筛选癌症患者术后抗肿瘤药物的检测技术平台的建立方法

权利要求书

1.一种筛选癌症患者术后抗肿瘤药物的检测技术平台的建立方法，其特征在于，所述建立方法为构建鹅胚绒毛膜尿囊膜PDX模型和小鼠PDX模型，并利用鹅胚绒毛膜尿囊膜PDX模型联合小鼠PDX模型辅助进行抗肿瘤药物的筛选；

所述建立方法包括以下步骤：

S1：鹅胚绒毛膜尿囊膜PDX模型和小鼠PDX模型的建立；

S2：模型肿瘤样本的多组学分析；

S3：基于模型的肿瘤药物药敏实验，以及肿瘤药物药敏分析；

所述建立方法具体包括以下步骤：

（1）组装和平衡孵化器，保持37.8℃和60-70%的湿度，注意使用无菌水以减少污染的可能；

（2）收到种蛋后，用纸巾或干布将表面擦干净，如表面粘连可用稍湿的布擦拭干净，并立即擦干，然后小头朝下静置12-24h；

（3）鹅蛋孵育；

（4）鹅胚绒毛膜尿囊开窗；

（5）接种肿瘤；

（6）观察肿瘤：将完成步骤（5）的种蛋置于培养箱中继续培养，每隔24h镜检拍照，记录肿瘤生长情况，完成模型构建；

（7）肿瘤药物筛选：建模7天后，根据基因测序分析肿瘤用药及常规化疗药物进行筛选，将药物滴加或血管注射至模型，每隔24h镜检拍照，记录肿瘤生长情况；

（8）若前期肿瘤药物分析为需经肝代谢药物，则需进一步构建小鼠PDX模型；

（9）根据鹅胚绒毛膜尿囊膜PDX模型及小鼠PDX模型，分析肿瘤药物敏感性，得出药物治疗效果，对数据综合分析，指导患者个体精准治疗。

2.根据权利要求1所述的建立方法，其特征在于，步骤（3）中所述鹅蛋孵育具体为：种蛋置于孵化器内孵化，孵化当天为0日龄，在蛋面记录日期，使用37.8℃恒温，湿度设置为1-7天60-65%；第一次照蛋在孵化的第7天，内有蜘蛛血丝即为受精蛋，可继续进一步实验。

3.根据权利要求1所述的建立方法，其特征在于，步骤（4）中所述开窗为第7-10天，因为第10天胚胎的免疫细胞开始产生。

4.根据权利要求1所述的建立方法，其特征在于，步骤（4）中所述开窗具体为：

S41：将生物安全柜用70%的乙醇消毒；

S42：将7日龄的种蛋置于蛋架上转移到已用70%乙醇消毒的生物安全柜里，照蛋，去除未受精蛋或坏蛋，其余的定位及标记气囊中心和静脉系统，用钻孔器在气囊中心和静脉系统中心开孔，注意保留内层的白膜，然后用18G针轻柔刺破白膜，不需要去除膜片；若孔中有血或白蛋白溢出，则种蛋需要丢弃；

S43：吸机辅助下将气囊从侧方移至静脉的上方，标记新气囊的边缘，用胶带封好，放回孵育箱；

S44：取出种蛋，用切割器和弯剪打开一个1.5cm×1.5cm的圆窗；确认胚胎的活力：活的胚胎将显示广泛的脉管系统，清楚的白蛋白，胚胎运动，或可见的心跳；

S45：用镊子夹持棉花轻擦去鹅胚绒毛膜尿囊膜表面的蛋壳，将浸泡过0.01%多聚赖氨酸的无菌硅胶圈放于鹅胚绒毛膜尿囊膜上，用无菌玻璃棒在圈内轻轻研磨数下。

5.根据权利要求4所述的建立方法，其特征在于：步骤（5）中所述接种肿瘤具体为：去除临床肿瘤样本的坏死组织、脂肪和纤维组织，然后切成1-2mm的薄片，放在活检组织培养基中浸洗，取出；将肿瘤组织样本置于所述无菌硅胶圈中央，并加入20-50ul细胞外基质，用透明薄膜敷料密封，放回培养箱，湿度调整为50-55%。

6.根据权利要求1所述的建立方法，其特征在于，步骤（8）中所述小鼠PDX模型的构建方法具体为：选择高度免疫缺陷小鼠，麻醉后将小鼠俯卧位固定，碘伏消毒接种区域皮肤；通过解剖显微镜，使用显微眼科剪将接种区域皮肤切开，用50ul微量进样针吸取微小组织块混悬液，缓慢注射到接种区域；每隔24h镜检拍照，记录肿瘤生长情况；建模两周后，进行药物筛选，根据药物动力学，选择注射或灌胃给药方式；每隔24h拍照，记录肿瘤生长情况。

7.一种筛选癌症患者术后抗肿瘤药物的检测技术平台，其特征在于，所述检测技术平台为利用权利要求1~6任一所述建立方法构建得到。

8.权利要求7所述筛选癌症患者术后抗肿瘤药物的检测技术平台的用途，其特征在于，用于筛选癌症患者术后抗肿瘤药物。