[发明专利]一种筛选癌症患者术后抗肿瘤药物的检测技术平台的建立方法

说明书

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种筛选癌症患者术后抗肿瘤药物的检测技术平台的建立方法。本发明的检测技术平台的建立，包括鹅胚绒毛膜尿囊膜PDX模型和小鼠PDX模型的建立，模型肿瘤样本的多组学分析，基于模型的肿瘤药物药敏实验，以及肿瘤药物药敏分析等四部分。本发明四个部分的关键技术方法及思路具体为：受精鹅蛋胚的孵育；肿瘤组织的制备，人源肿瘤微组织块种植于鹅胚绒毛膜尿囊膜表面；模型肿瘤微组织块种植于小鼠皮下；肿瘤药物滴加或注射；观察肿瘤组织大小、终止观察后行多组学分析肿瘤药物敏感性；最后综合分析出肿瘤患者的个体精准治疗方案。本发明通过联合两个PDX模型，可有效及全面筛选出患者个体化肿瘤药物治疗方案。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种筛选癌症患者术后抗肿瘤药物的检测技术平台的建立方法。

背景技术

随着检测手段的更新，我国恶性肿瘤患者被检出数逐年升高。我国每年新发恶性肿瘤病例高达450万，每年因为恶性肿瘤致死患者高达300万。肿瘤诊治方式发展日新月异，给予患者和医生的选择也琳琅满目，但如何筛选适合个体的精准治疗方案，一直是我国医学界的研究和工作重点。

传统的抗肿瘤药效研究都是基于细胞为载体进行研究，但是由于细胞系长期体外传代导致生物学特征、基因谱表达水平、肿瘤异质性发生改变，药效评价结果与临床相似度不到5%。PDX模型则能很好保留上述特征，药效评价结果与临床相似度高达87%以上，因此越来越受重视。目前PDX模型载体多建立于免疫缺陷鼠及鸡胚绒毛尿囊系统，但是其缺点分别是小鼠构建周期长，价格昂贵；鸡胚绒毛尿囊系统观察周期过短，仅有一周观察时间，且对于需要通过肝代谢药物无法筛选。鹅胚绒毛膜尿囊膜PDX联合小鼠PDX辅助筛选癌症患者术后肿瘤药物的检测技术平台可完美弥补两者的缺点，鹅胚绒毛膜尿囊膜系统可观察时间为14-16天，构建成本低，成功率高，可更好地评价及筛选药物。同时通过鹅胚绒毛膜尿囊膜系统培养的肿瘤，由于肿瘤纯度的提升，可有效缩短小鼠PDX构建的周期。

未来可通过鹅胚绒毛膜尿囊膜PDX联合小鼠PDX辅助筛选癌症患者术后肿瘤药物的检测技术平台为肿瘤患者筛选出个体化的治疗方案，有可能为患者的精准治疗提供依据。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种筛选癌症患者术后抗肿瘤药物的检测技术平台的建立方法。

本发明基于鹅胚绒毛膜尿囊膜PDX联合小鼠PDX辅助筛选癌症患者术后肿瘤药物的检测技术平台对各类实体肿瘤及胸、腹水中游离肿瘤细胞筛选最为适宜的肿瘤药物，进而达到个体精确治疗的临床目标。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：提供一种筛选癌症患者术后抗肿瘤药物的检测技术平台的建立方法，所述建立方法为构建鹅胚绒毛膜尿囊膜PDX模型和小鼠PDX模型，并利用鹅胚绒毛膜尿囊膜PDX模型联合小鼠PDX模型辅助进行抗肿瘤药物的筛选。

作为本发明所述建立方法的优选实施方式，所述建立方法包括以下步骤：

S1：鹅胚绒毛膜尿囊膜PDX模型和小鼠PDX模型的建立；

S2：模型肿瘤样本的多组学分析；

S3：基于模型的肿瘤药物药敏实验，以及肿瘤药物药敏分析。

作为本发明所述建立方法的优选实施方式，所述建立方法具体包括以下步骤：

（1）组装和平衡孵化器，保持37.8℃和60-70%的湿度，注意使用无菌水以减少污染的可能；

（2）收到种蛋后，用纸巾或干布将表面擦干净，如表面粘连可用稍湿的布擦拭干净，并立即擦干，然后小头朝下静置12-24h；

（3）鹅蛋孵育；

（4）鹅胚绒毛膜尿囊开窗；

（5）接种肿瘤；