[发明专利]L-鼠李糖抗体在制备预防和/或治疗耐药细菌感染的药物中的应用

权利要求书

1.L-鼠李糖抗体在制备预防和/或治疗耐药细菌感染的药物中的应用，其特征在于，所述L-鼠李糖抗体特异性地识别L-鼠李糖，所述L-鼠李糖抗体为人源L-鼠李糖天然抗体或鼠源L-鼠李糖单克隆抗体；所述耐药细菌为基因组中含有L-鼠李糖合成途径的耐药细菌。

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述人源L-鼠李糖天然抗体的制备方法步骤如下：

(1)合成L-鼠李糖-NH₂

将L-鼠李糖经乙酰基保护和苯硫酚糖基化反应后得到中间产物1，中间产物1与3-叠氮基丙醇连接得到中间产物2，中间产物2经脱乙酰基保护和还原反应得到L-鼠李糖-NH₂；

(2)制备L-鼠李糖亲和层析柱

取NHS活化的琼脂糖凝胶装柱，经冲洗和平衡后加入步骤(1)制备的L-鼠李糖-NH₂，混合均匀，室温下缓慢摇动反应3～5小时，然后加入封闭液，室温下缓慢摇动反应0.5～1.5小时，再经洗涤液A、洗涤液B洗涤后得到L-鼠李糖亲和层析柱，4℃保存于20％乙醇中；

(3)纯化L-鼠李糖天然抗体

取步骤(2)制备的L-鼠李糖亲和层析柱，经冲洗和平衡后加入血清，混合均匀后室温孵育3～4小时，再次冲洗L-鼠李糖亲和层析柱后进行洗脱，收集洗脱液，调节洗脱液的pH为中性，最后洗脱液经超滤浓缩后得到人源L-鼠李糖天然抗体。

3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，步骤(1)中，所述L-鼠李糖和苯硫酚的摩尔比为1:1.1；所述中间产物1与3-叠氮基丙醇的摩尔比为1:2。

4.如权利要求2所述的应用，其特征在于，步骤(2)中，所述冲洗的冲洗液为预冷后的1mM HCl，冲洗液体积为10～15个柱体积；所述平衡的平衡液为0.2M NaHCO₃、0.5M NaCl溶液，pH 8～9，平衡液体积为3～5个柱体积；所述L-鼠李糖-NH₂的加入量为1～2个柱体积，浓度为5～15mg/mL；所述封闭液为0.1M Tris-HCl溶液，pH 8.5，加入量为3～5个柱体积；所述洗涤液A为0.1M Tris-HCl、0.5M NaCl溶液，pH 8～9；洗涤液B为0.1M HCOOH、0.5MNaCl溶液，pH 3～5；洗涤液A和B交替洗涤3～6次，每次洗涤过程中洗涤液A的体积为2～4个柱体积，洗涤液B的体积为2～4个柱体积，最后用2～4个柱体积的去离子水冲洗1～2次；

步骤(3)中，所述冲洗的冲洗液为去离子水，冲洗液体积为10～15个柱体积；所述平衡的平衡液为1×PBS缓冲液，pH 7.4，平衡液体积为10～15个柱体积；所述血清为健康成人血清，血清加入量为10～15个柱体积。所述洗脱的洗脱液为0.2M甘氨酸溶液，pH 2～3；所述超滤浓缩使用8～12kDa的超滤管进行。