[发明专利]一种转染miRNA的细胞膜片及其应用

权利要求书

1.一种转染miRNA的细胞膜片，其特征在于：其由骨髓间充质干细胞形成；其细胞中的MicroRNA let-7a的含量上调。

2.根据权利要求1所述的一种转染miRNA的细胞膜片，其特征在于：其转染有let-7amimic，let-7a mimic的正义链的序列如SEQ ID NO.2所示，反义链的序列如SEQ ID NO.3所示。

3.根据权利要求2所述的一种转染miRNA的细胞膜片，其特征在于：所述骨髓间充质干细胞为P3-P5代骨髓间充质干细胞。

4.根据权利要求3所述的一种转染miRNA的细胞膜片，其特征在于：其由如下方法制备：接种并使用完全培养基培养骨髓间充质干细胞，待细胞密度达到70-80％之后，将完全培养基更换为膜片诱导液培养7天，获得细胞膜片；然后将膜片诱导液更换为含有10％FBS的α-MEM培养基；再培养一天后，使用let-7a mimic转染骨髓间充质干细胞；完成转染后，对骨髓间充质干细胞进行成骨诱导，获得转染miRNA的细胞膜片。

5.根据权利要求4所述的一种转染miRNA的细胞膜片，其特征在于：使用let-7a mimic转染骨髓间充质干细胞的方法为：在含有10％FBS的α-MEM培养基中加入let-7a mimic和Lipofectamine 2000，let-7a mimic的终浓度为50nM，转染时长为4-6h；完成转染后，将培养基再次更换为含有10％FBS的α-MEM培养基。

6.根据权利要求5所述的一种转染miRNA的细胞膜片，其特征在于：所述骨髓间充质干细胞的接种量3×10⁵个/孔。

7.根据权利要求6所述的一种转染miRNA的细胞膜片，其特征在于：所述完全培养基为用α-MEM配制的含10％的FBS、1％的青链霉素双抗的培养基，所述膜片诱导液为含50μg/mL维生素C的完全培养基。

8.根据权利要求7所述的一种转染miRNA的细胞膜片，其特征在于：所述成骨诱导的时机为完成转染后24h。

9.根据权利要求1-8中任一项所述的一种转染miRNA的细胞膜片在制备颌骨缺损修复材料中的应用。

10.根据权利要求9所述的一种转染miRNA的细胞膜片在制备颌骨缺损修复材料中的应用，其特征在于：使用三层转染miRNA的细胞膜片包裹羟基磷灰石-磷酸三钙，获得移植物。