[发明专利]一种M1型巨噬细胞外泌体疫苗及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种M1型巨噬细胞外泌体疫苗，其特征是，所述外泌体疫苗通过以下方法制备：

（a）携带抗原的M1型巨噬细胞的培养：用50-200ng/mL的脂多糖对培养的原代巨噬细胞孵育12-24 h，使原代巨噬细胞极化为M1型巨噬细胞；然后用0.05-0.15mg/mL的肿瘤抗原OVA与M1型巨噬细胞共孵育24-48 h，得到携带肿瘤抗原OVA的M1型巨噬细胞；

（b）提取外泌体疫苗：将上述细胞正常培养2天后收集细胞培养上清液，先利用 100 KD超滤离心管在 4500 g 转速4°C条件下离心，浓缩外泌体并除去培养上清中的小颗粒杂质；浓缩后的细胞上清在转速2000 g，4°C，30 min 离心，收集上清，然在转速10000 g，4°C，45min 再次离心，以去除较大的囊泡；取上清，经0.45 μm滤膜过滤，收集过滤液；将过滤液移至新的离心管中，选择超速转子，4°C，100000 g 离心70 min；去除上清，用 10 mL 预冷的PBS重悬后，选择超速转子，再次4°C，100000 g，超速离心70 min；去除上清，用100 μL预冷的PBS重悬，得到M1_OVA-Exos外泌体疫苗。

2.根据权利要求1所述的外泌体疫苗，其特征是，所述原代巨噬细胞为人或小鼠来源的巨噬细胞。

3.权利要求1所述的M1型巨噬细胞外泌体疫苗在制备针对肿瘤微环境的免疫调节药物中的应用。