[发明专利]一种测定尿囊素铝水解产物尿囊素的HILIC-HPLC-UV法

说明书

本发明涉及一种测定尿囊素铝水解产物尿囊素的HILIC‑HPLC‑UV法，所述方法，步骤如下：步骤1，对照品溶液的制备：精密称取尿囊素对照品置量瓶中，加适量PBS，超声溶解，放冷，加PBS稀释至刻度，摇匀，即尿囊素对照品储备溶液；步骤2，供试品溶液的制备：取尿囊素铝约1000mg，精密称定，置100mL量瓶中，加甲醇超声溶解，放至室温，加甲醇稀释定容至刻度，摇匀，得到供试品溶液；步骤3，测定：将对照品溶液，供试品溶液注入HILIC‑HPLC‑UV色谱仪，得到色谱图，根据色谱图，计算供试品溶液中尿囊素的含量。

技术领域

本发明采用HILIC-HPLC-UV方法进行原料药尿囊素铝及肠灌流实验生物样品中尿囊素的含量测定，并完成相关方法学实验，以验证该分析方法的准确性和可靠性，本法适用于原料药尿囊素铝的质量控制及肠灌流实验生物样品中尿囊素的含量测定。

背景技术

尿囊素铝，别名二羟基尿囊素铝；尿羟铝；胃肠宁；为制酸及胃黏膜保护药，上市剂型片剂：100mg，含尿囊素55mg、氢氧化化铝45mg。尿囊素铝的药理作用：能加速损伤部位正常肉芽组织的生长及促进黏膜上皮细胞的再生。尿囊素铝的适应证：消化道黏膜保护药。用于胃溃疡、十二指肠球部溃疡、慢性胃炎。尿囊素铝中，尿囊素的结构式如下：尿囊素是尿素的衍生物，农业和轻化工领域。尿囊素广泛存在于自然界，如胎儿的尿以及除人和类人猿以外的其他所有哺乳动物的尿囊液中都含有尿囊素。在一些植物体中，如烟草籽、麦种、甜菜、药用倒提壶草、紫藤花及紫草科中的雏菊根中也含有尿囊素。

良好的生物利用度是口服药物能够通过临床前研究的关键，影响化合物生物利用度的因素主要包括化合物在肠道环境中的物理化学性质(溶解度、稳定性)和生物药剂学性质(渗透性、代谢稳定性)。若化合物的水溶性和脂溶性均较差，意味着其吸收差、口服生物利用度低，从而限制该化合物的临床应用。首先从尿囊素的理化参数入手，并对其口服吸收情况进行初步的预测。

现有尿囊素的检测方法如下：

(1)反相色谱法，长时间使用高水相分离极性化合物，会导致十八烷基硅烷链发生坍塌，从而出现保留时间变化、重现性差和柱效降低等问题。

(2)氨基柱的反相使用：利用Phenomenex NH2色谱柱，在210nm处对一中药方剂中的尿囊素进行了分离测定，采用等度洗脱的方法，比例为4：6的水(A) -乙腈(B)，该HPLC方法操作简便，且分离度良好。

(3)亲水作用色谱法(HILIC)：极性化合物在HILIC使用的水性流动相中具有良好的溶解性，从而克服了NPLC中经常遇到的溶解性差的缺点；尿囊素在溶液中存在烯醇式与酮式互变，ELSD的定量检测原理是利用非挥发性颗粒的光散射，可以避免这种结构互变产生的影响。

(4)气相色谱法：使用衍生试剂将尿囊素进行衍生化以改变其色谱行为后，可采用GC对其进行定量分析。衍生化步骤相对耗时，在一定程度上限制的GC-MS 测定尿囊素的广泛应用。

(5)化学发光法：CL方法的优点是灵敏度、稳定性更高，分析物用量减少，可省去固相萃取、衍生化、色谱分离等步骤，并且大大降低了实验的成本(同位素内标、昂贵的分析仪器等)。该方法的适用性在测定人体尿液和眼药水中的尿囊素的实验中得以验证。

液相色谱方法是分析尿囊素的主要方法，传统方法通常是将RPLC与柱前衍生化技术结合使用。随着色谱技术的发展，尿囊素的分析可以使用具有极性特征的 RPLC固定相以及HILIC色谱柱，HILIC也是最有前途的方法之一。

发明内容

本发明采用HILIC-HPLC-UV方法进行原料药尿囊素铝的含量测定，该方法简单、效率较高。

本发明的方法，步骤如下：

步骤1，对照品溶液的制备：精密称取尿囊素对照品置量瓶中，加适量PBS，超声溶解，放冷，加PBS稀释至刻度，摇匀，即尿囊素对照品储备溶液。