[发明专利]一种用于PVIII蛋白展示外源肽的噬菌粒载体及其构建方法在审
| 申请号： | 202110703610.8 | 申请日： | 2021-06-24 |
| 公开（公告）号： | CN113637696A | 公开（公告）日： | 2021-11-12 |
| 发明（设计）人： | 殷俊磊;程瞾;孙伟伟;潘鹏涛;杨祎洁;王振宇;刘国燕;开悦;高姿 | 申请（专利权）人： | 新乡学院 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12N15/66;C12N15/10;C07K14/00 |
| 代理公司： | 北京慕达星云知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 11465 | 代理人： | 王敏 |
| 地址： | 453000 河*** | 国省代码： | 河南;41 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 用于 pviii 蛋白 展示 外源肽 噬菌粒 载体 及其 构建 方法 | ||
1.一种用于PVIII蛋白展示外源肽的噬菌粒载体，其特征在于，将丝状噬菌体PVIII基因定向克隆到原核表达载体pKK223-3的多克隆位点上，制备得到噬菌粒载体pKK8。
2.根据权利要求1所述的一种用于PVIII蛋白展示外源肽的噬菌粒载体的构建方法，其特征在于，具体步骤如下：
(1)将原核表达载体pKK223-3用EcoR I和HindIII进行双酶切，获得酶切后的载体pKK223-3；
(2)以载体fADL-le为模板，利用引物PF1/PR1 PCR扩增PVIII基因；并用EcoR I和HindIII进行双酶切，获得酶切后的PVIII基因目的片段；
(3)将步骤(1)获得的酶切后的载体pKK223-3与步骤(2)获得的酶切后的PVIII基因目的片段进行连接，转化，筛选阳性克隆，获得噬菌粒载体pKK8。
3.根据权利要求2所述的一种用于PVIII蛋白展示外源肽的噬菌粒载体的构建方法，其特征在于，步骤(2)所述引物PF1/PR1的引物序列如下：
PF1：5’-TTCCGGAATTCGTAGTGGCATTACG-3’；SEQ ID NO.2；
PR1：5’-ACGGCAAGCTTCTGTATGAGGTTTT-3’；SEQ ID NO.3。
4.根据权利要求2所述的一种用于PVIII蛋白展示外源肽的噬菌粒载体的构建方法，其特征在于，步骤(2)所述PCR扩增的反应体系如下：载体fADL-le 1μl，PF11μl，PR11μl，Premix Ex Taq Hot StartVersion 10μl，灭菌水7μl。
5.根据权利要求2所述的一种用于PVIII蛋白展示外源肽的噬菌粒载体的构建方法，其特征在于，步骤(2)所述PCR扩增的反应程序如下：94℃预变性8min；94℃30s，56℃40s，72℃30s，35个循环；72℃延伸10min。
6.权利要求1-5任一项所述的噬菌粒载体pKK8在展示外源多肽中的应用。
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