[发明专利]一种头花蓼提取物对喹诺酮类药物吸收作用的测定方法

权利要求书

1.一种头花蓼提取物对喹诺酮类药物吸收作用的测定方法，其特征在于该方法包括如下步骤：建立Caco-2细胞体外吸收模型，设立头花蓼提取物组、喹诺酮类药物组、头花蓼提取物与喹诺酮类药物合用组，利用BCA试剂盒技术和UPLC-MS/MS法考察头花蓼提取物中两个指标性成分没食子酸、原儿茶酸与喹诺酮类药物单用和合用时的摄取量差异。

2.根据根据权利要求1所述的头花蓼提取物对喹诺酮类药物吸收作用的测定方法，其特征在于：所述喹诺酮类药物为左氧氟沙星。

3.根据权利要求1所述的头花蓼提取物对喹诺酮类药物吸收作用的测定方法，其特征在于：Caco-2细胞体外吸收模型的建立包括Caco-2细胞的培养及形态变化和细胞摄取过程；其中，Caco-2细胞的培养及形态变化包括如下步骤：选取Caco-2细胞，将其接种于高糖DMEM培养基的培养液中，置于培养箱中培养；待细胞生长至预定状态，采用胰蛋白酶消化液消化细胞接种于培养板，一周内隔天换1次培养液，1周后每天换液1次，细胞培养至细胞单层膜形成。

4.根据权利要求3所述的头花蓼提取物对喹诺酮类药物吸收作用的测定方法，其特征在于：所述细胞摄取过程包括如下步骤：将培养并形成单层膜状态的Caco-2细胞用HBSS缓冲溶液在培养箱中培养后，弃去缓冲溶液；再用HBSS缓冲溶液洗去细胞单分子层表面的杂质，连续冲洗两遍；加入含药的HBSS溶液培养，取出后，加入屈臣氏水溶液终止化合物的细胞摄取实验，并快速用屈臣氏水溶液清洗三遍细胞单分子层，最后加入屈臣氏水溶液；反复冻融裂解细胞，取出细胞超声处理，得细胞悬液，低温保存待处理。

5.根据权利要求3所述的头花蓼提取物对喹诺酮类药物吸收作用的测定方法，其特征在于：该方法包括溶液配制步骤，其中，头花蓼提取物母液配制步骤如下：称取头花蓼提取物，加入PBS和DMSO，配制成头花蓼溶液，低温保存备用；左氧氟沙星母液配制步骤如下：称取左氧氟沙星标准品粉末，加入PBS和DMSO，配制成左氧氟沙星溶液，低温保存备用；标准溶液和储备溶液的配制步骤如下：精密称取原儿茶酸，没食子酸，左氧氟沙星，置于容量瓶中，并用甲醇定容，获得原儿茶酸，没食子酸，左氧氟沙星的储备液；分别精密量取3种对照品储备液适量，用甲醇按梯度稀释成所需浓度，得混合系列标准溶液，低温保存备用；精密称取葛根素，用甲醇定容获得葛根素的储备液；取内标储备液至容量瓶中，用甲醇定容至刻度，配制成内标溶液，低温保存备用。

6.根据权利要求3所述的头花蓼提取物对喹诺酮类药物吸收作用的测定方法，其特征在于：UPLC-MS/MS法的测定条件如下：

色谱条件：色谱柱：Waters BEH C₁₈柱；保护柱：Waters Van Guard BEH C₁₈柱，流速：0.30mL/min，柱温：40℃，进样器的温度：25℃，进样体积为1μL；流动相：0.1％甲酸乙腈A-0.1％甲酸水B梯度洗脱，梯度洗脱条件：0～0.3min 90％A，0.3～1min 90～85％A，1～2min85～90％A，2～3min 90％A，3～4min 90～10％A；

质谱条件：采用电喷雾电离源，正、负离子模式下扫描采集数据，毛细管电压：2.0kV，离子源温度：120℃；喷雾气与反吹气：N₂，去溶剂气流速：800L^/hr，去溶剂气温度：400℃，扫描方式为选择离子监测，质谱数据采集及处理软件为MassLynx4.1质谱工作站。

7.根据权利要求1-6中任意一项所述的头花蓼提取物对喹诺酮类药物吸收作用的测定方法，其特征在于：左氧氟沙星单用及其与头花蓼提取物合用的细胞摄取过程包括如下步骤：将培养14天并形成单层膜状态的Caco-2细胞用HBSS缓冲液洗去其表面杂质，用于实验；实验分为三组：头花蓼提取物给药组：加入浓度为1mg/mL头花蓼提取物溶液2mL；左氧氟沙星给药组：加入浓度为160μmol/L左氧氟沙星提取物溶液2mL；头花蓼提取物与左氧氟沙星合用组：加入终浓度为1mg/mL头花蓼提取物溶液和浓度为160μmol/L左氧氟沙星提取物溶液共2mL，放置37℃的培养箱，培养1h，取出后，加入4℃的屈臣氏水溶液终止化合物的细胞摄取实验，并快速用屈臣氏水溶液清洗三遍细胞单分子层，最后每孔加入2mL的屈臣氏水溶液；反复冻融裂解细胞，取出细胞超声10min，得细胞悬液，置-20℃冰箱保存，待处理。