[发明专利]一种高比例B7H4阳性脐带间充质干细胞、其培养方法及培养液

说明书

本发明属于干细胞培养技术领域，具体涉及一种高比例B7H4阳性脐带间充质干细胞、其培养方法及培养液。本发明的脐带间充质干细胞中表达B7H4分子的比例大于等于45％。优选的，本发明的脐带间充质干细胞表面表达PD‑L1分子的比例大于等于40％。本发明还进一步提供了用于培养上述脐带间充质干细胞的含有IL‑6的刺激培养液及培养方法。本发明的脐带间充质干细胞在体内的存活时间长，因而有利于调高间充质干细胞治疗的疗效，其具有很好的应用前景。

技术领域

本发明属于干细胞培养技术领域，具体涉及一种高比例B7H4阳性脐带间充质干细胞、其培养方法及培养液。

背景技术

脐带间充质干细胞(Umbilical cord mesenchymal stem cells，UC-MSCs)是一种来源丰富、易于分离培养的干细胞，UC-MSCs也是应用于临床试验最广泛的细胞，治疗的病种涉及到自身免疫性疾病，糖尿病，肝脏疾病和心血管疾病等多个方面。

UC-MSCs的临床试验研究进展迅速，结果也令人欢欣鼓舞，但是干细胞治疗也存在诸多问题。例如损伤组织部位缺氧环境和炎性因子对的干细胞存活时间和免疫调节功能的影响等。而延长干细胞在体内的存活时间，就可以调高间充质干细胞治疗的疗效，这对于间充质干细胞治疗技术更好地应用于临床十分重要。目前延长间充质干细胞的体内存活时间的方法主要有低氧预处理培养法，预先将间充质干细胞在低氧环境(体积分数1％氧气)中生长一段时间，使其抗凋亡因子表达升高，进而增加体内存活时间。但是间充质干细胞低氧处理需要特殊的昂贵设备如低氧细胞培养箱。而且间充质干细胞低氧处理过程中需要消耗大量的氮气，导致成本进一步升高，使得其推广受到一定的限制。

白介素-6(IL-6)是一种炎症调解因子，不仅可以调节免疫细胞的功能，还能调控干细胞的生长和分化过程。IL-6在UC-MSCs的培养中的应用已有相关研究，例如中国发明专利“CN109777771B原代脐带间充质干细胞的无血清培养基及其使用方法”中，采用IL-3、IL-6、G-CSF和SCF等细胞因子可协同FL产生强烈的增殖效应同时抑制脐带间充质干细胞的分化。然而，目前人们对于将IL-6用于UC-MSCs的培养究竟能够产生什么作用的认识仍然不够全面，其对于UC-MSCs的存活时间等性能的影响仍然是未知的。

发明内容

针对现有技术的缺陷，本发明提供一种高比例B7H4阳性脐带间充质干细胞、其培养方法及培养液。目的在于提供一种能够长时间在体内存活的脐带间充质干细胞。

一种脐带间充质干细胞，所述脐带间充质干细胞表面表达B7H4分子的比例大于等于45％。

优选的，所述脐带间充质干细胞表面表达B7H4分子的比例为45-61.8％。

优选的，所述脐带间充质干细胞表面表达PD-L1分子的比例大于等于40％。

优选的，所述脐带间充质干细胞表面表达PD-L1分子的比例为40-51.5％。

优选的，所述脐带间充质干细胞采用同时含有IL-6和IL-6Rα的刺激培养液培养得到。

本发明还提供上述脐带间充质干细胞的培养方法，包括如下步骤：

(1)接种并培养脐带间充质干细胞；

(2)使用同时含有IL-6和IL-6Rα的刺激培养液培养所述脐带间充质干细胞；

(3)消化步骤(2)得到的脐带间充质干细胞，吹打，终止消化，即得。

优选的，步骤(1)中，接种密度为10000-20000细胞/cm²；和/或，所述培养的条件为在37℃，体积分数5％CO₂浓度下培养24小时；

和/或，步骤(1)所用培养液是以L-DMEM培养液作为基础培养基，添加有终浓度为：