[发明专利]一种循环神经细胞的检测方法、试剂盒和应用

说明书

本发明公开了一种循环神经细胞的检测方法、试剂盒和应用，涉及生物细胞鉴定技术领域，基于葡萄糖代谢性标志物2‑NBDG、白细胞经典标志物CD45对微孔阵列芯片上的细胞进行染色，借助显微成像系统，实现循环神经细胞的快速识别，其中2‑NBDG+/CD45‑的神经细胞被认为是具有活性的循环神经细胞。进行循环神经细胞检测的试剂盒包括荧光标记的葡萄糖代谢性标志物2‑NBDG。该方法应用于人外周血中循环神经细胞的检测和实时监测。本发明在不依赖于神经元细胞胞内经典抗原表达的情况下，实现循环神经细胞的快速识别，而且不破坏循环神经细胞的活性，可进行后续的单细胞基因组测序及体外培养等用途，以获得全面的生物信息。

技术领域

本发明涉及生物细胞鉴定技术领域，尤其涉及一种循环神经细胞的检测方法、试剂盒及其应用。

背景技术

血脑屏障(Blood-Brain Barrier,BBB)是一个可以调节循环系统与脑实质之间的物质交换的动态网络，同时还能维持中枢神经系统(Central Neural System，CNS)的体内平衡。中枢神经系统疾病主要包括脑卒中(Stroke)、神经退行性疾病(Neurodegenerativediseases)、脑肿瘤(Brain tumor)、脑损伤(Brain injury)及年龄相关的认知功能障碍(Cognitive dysfunction)等均存在血脑屏障功能障碍。中枢神经系统疾病(Centralnervous system diseases)被越来越多地认为是全世界死亡和残疾的主要原因。《2016年全球疾病、伤害和危险因素负担》研究表明，神经系统疾病负担最重，而且这种负担正在增加。中国是世界上人口最多的国家，也是世界上老年人口最庞大的国家，据不完全统计目前中国65岁以上的老年人口已超过1.77亿，同时也是神经系统疾病患者最多的国家，中枢神经系统疾病是一个日益严重的全球性健康问题，严重威胁着人类健康和生活质量，并给家庭和社会带来巨大负担(11)。目前，针对血脑屏障损伤相关中枢神经系统疾病的诊断方法主要依赖于临床检查和神经影像学的诊断，在很大程度上依赖于医疗体系。血脑屏障功能障碍相关中枢神经系统疾病作为全球发病率和死亡率的主要因素，目前仍缺乏有效量化检测其发生和发展的有效的细胞层面的生物标志物。

快速准确的诊断中枢神经系统疾病的亚型对于患者的正确治疗是非常重要的。目前针对于血脑屏障渗透性的诊断方法主要依赖于神经影像学的诊断和临床检查。其中神经影像学的诊断主要是基于计算机断层扫描技术(Computed Tomography,CT)、计算机体层摄影血管造影(Computed Tomography Angiography,CTA)、磁共振成像(Magnetic ResonanceImaging,MRI)、正电子发射断层扫描(Positron Emission Tomography,PET)等影像学方法，这些方法均需依赖于医疗体系才能进行相应的检测。在诊断过程中由于BBB通透性增加涉及造影剂的一些诊断方法，当造影剂从外围注射后可以进入脑实质，对大脑带来进一步的影响。