[发明专利]一种具有免疫增强作用的硒化大蒜多糖及其制备方法

说明书

一种具有免疫增强作用的硒化大蒜多糖及其制备方法，所述处理方法包括如下步骤：S1、将大蒜研磨碎，冷冻干燥；S2、用三氯乙酸法除去蛋白质，再经冷冻干燥；S3、以亚硒酸钠的用量、反应温度和反应时间三因素、三水平设计正交试验，以优化硒化修饰条件，得到9种硒化大蒜多糖sGPS₁~sGPS₉；S4、采用苯酚‑硫酸法测定多糖的糖含量，并采用紫外线可见分光光度计测定；S5、超纯水稀释，加高氯酸‑硝酸混合酸，并放置于冰箱冷消化，得到溶液；S6、进行加热与冷却，再用电感耦合等离子质谱仪测定溶液中硒的含量。该具有免疫增强作用的硒化大蒜多糖及其制备方法，硒化修饰提高了多糖的热稳定性，对雏鸡具有促生长作用，且有较好的安全性。

技术领域

本发明涉及药材加工技术领域，特别涉及一种具有免疫增强作用的硒化大蒜多糖及其制备方法。

背景技术

近年来，动物疫病频发且日趋复杂，防控难度不断加大，尤其是非洲猪瘟、禽流感、猪蓝耳病等的爆发与流行给养殖业带来了巨大冲击，已成为困扰养殖业的大难题。除了做好良好的饲养管理和严格的生物安全措施，疫苗接种是防控这些传染病的重要措施。然而临床上动物疫苗免疫过程中，疫苗不能诱生高水平抗体、机体自身免疫力低下或处于免疫抑制状态等常导致疫苗免疫失败。因此，通过免疫增强剂诱导机体产生强烈免疫应答，提高疫苗免疫效果就显得尤为重要。大量研究表明，许多中药成分尤其是中药多糖，单方或复方制剂对健康动物或免疫抑制动物具有良好免疫调节作用，因此在提高动物免疫功能方面越来越受到人们的重视，成为免疫增强剂领域的研究热点。

大蒜是一种常用的药食两用的中药材，医学研究表明，大蒜具有抗菌、抗病毒、抗真菌与增强免疫等多种功效。大蒜多糖是大蒜的主要药效成分之一，现代药理学研究表明，大蒜多糖（garlicpolysaccharide，GPS））具有增强免疫、抗氧化、保肝、抗病毒、抗炎、调节肠道菌群、抗凝血、抗肿瘤等多种药理活性，在食品工业、医药行业和畜牧兽医等多领域应用前景广阔。硒是动物必需的微量元素，具有增强免疫与抗氧化的药理作用。硒与多糖结合成硒多糖后，不仅兼有硒和多糖的双重生物活性，而且可以一定程度上增强多糖的药理活性或提高其生物利用度。为此，本研究采用硝酸-亚硒酸钠法制备硒化大蒜多糖（seleniumGarlicpolysaccharide，sGPS），并通过测定体液免疫相关指标、黏膜免疫相关指标、细胞因子分泌水平，评价了硒化大蒜多糖对鸡新城疫疫苗免疫效果的影响，为新型中药免疫增强剂的开发与应用提供参考依据。

发明内容

本发明的主要目的在于提供一种具有免疫增强作用的硒化大蒜多糖及其制备方法，可以有效解决背景技术中的问题。

一种具有免疫增强作用的硒化大蒜多糖及其制备方法，所述处理方法包括如下步骤：

S1、将大蒜研磨碎并采用水提醇沉法提取大蒜粗多糖cGPS，冷冻干燥；

S2、用三氯乙酸法除去cGPS中的蛋白质，再经冷冻干燥，得纯化的大蒜多糖GPS；

S3、采用硝酸-亚硒酸钠法，分别以亚硒酸钠的用量、反应温度和反应时间三因素、三水平设计正交试验，以优化硒化修饰条件，得到9种硒化大蒜多糖sGPS₁~sGPS₉；

S4、将GPS、sGPS并溶于去离子水中，采用苯酚-硫酸法测定多糖的糖含量，并采用紫外线可见分光光度计测定；

S5、精密称取sGPS并用超纯水稀释，加高氯酸-硝酸混合酸，并放置于冰箱冷消化，得到溶液；

S6、将溶液置于通风厨内，进行加热与冷却，再用电感耦合等离子质谱仪测定溶液中硒的含量。

进一步，所述步骤S1中包括：

①加无水乙醇浸泡12h后用索氏提取器回流脱脂2次，每次2h，纱布过滤取蒜末，65℃烘干后称重，加入7倍质量的水100℃浸提240min，再将浸提液浓缩至1/5体积，2500r/min离心10min，上清液缓慢加无水乙醇定容至80%，4℃冰箱静置过夜；