[发明专利]一种芋螺抗皱素的制备方法

权利要求书

1.一种芋螺抗皱素的制备方法，其特征在于，主要包括以下步骤：

步骤1：在固相载体上，按照芋螺抗皱素肽序采用固相合成方法在碱或者缩合剂存在下进行逐步缩合或片段偶联，得到芋螺抗皱素全保护肽树脂；

步骤2：将步骤1制得的芋螺抗皱素全保护肽树脂经裂解试剂裂解后，得到芋螺抗皱素线性肽；

步骤3：将步骤2制得的芋螺抗皱素线性肽经环化液环化后，得到芋螺抗皱素粗品；其中，环化液体系的pH范围为5～7.9；

步骤4：将步骤3制得的芋螺抗皱素粗品经纯化、转盐、浓缩、冷冻干燥，得到芋螺抗皱素精肽。

2.根据权利要求1所述的一种芋螺抗皱素的制备方法，其特征在于，所述步骤1具体为：在碱或者缩合剂存在下，将固相载体依次与Fmoc-Cys(Trt)-OH、Fmoc-Cys(Trt)-OH、Fmoc-Arg(pbf)-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-His(Trt)-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Arg(pbf)-OH、Fmoc-Cys(Trt)-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Cys(Trt)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Cys(Trt)-OH、Fmoc-Cys(Trt)-OH、Fmoc-Gly-OH、H-Pyr-OH进行缩合，得到芋螺抗皱素全保护肽树脂：Pyr-Gly-Cys(Trt)-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Gly-Pro-Lys(Boc)-Gly-Cys(Trt)-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Trp(Boc)-Cys(Trt)-Arg(Pbf)-Asp(OtBu)-His(Trt)-Ala-Arg(Pbf)-Cys(Trt)-Cys(Trt)-树脂；

3.根据权利要求1或2所述的一种芋螺抗皱素的制备方法，其特征在于，所述固相载体选自AM Resin、HMBA Resin、Rink Amide Resin、Rink Amide AM Resin、Rink Amide MBHAResin、PAL Resin中的一种。

4.根据权利要求3所述的一种芋螺抗皱素的制备方法，其特征在于，所述固相载体的替代度为0.2mmol/g～0.7mmol/g。

5.根据权利要求1或2所述的一种芋螺抗皱素的制备方法，其特征在于，所述缩合剂选自HOBt、HOAT、DIC、DCC、EDC.HCl、HATU、HBTU、HCTU、Py.BOP、Py.AOP、DPPA。

6.根据权利要求5所述的一种芋螺抗皱素的制备方法，其特征在于，所述缩合剂选自HOBt、HOAT、DPPA。

7.根据权利要求1或2所述的一种芋螺抗皱素的制备方法，其特征在于，所述碱选自DIEA、吡啶、碳酸氢钠、碳酸钠、吗啡啉、氢氧化钠中的一种。

8.根据权利要求1所述的一种芋螺抗皱素的制备方法，其特征在于，所述步骤2裂解试剂为TFA、DODT和X的混合溶液，X选自Tis、Mpr、H₂O；其中，TFA占裂解液的体积百分比为85％-90％，且DODT体积百分比为1％-10％。

9.根据权利要求1所述的一种芋螺抗皱素的制备方法，其特征在于，所述步骤3芋螺抗皱素线性肽环化时采用的方法选自空气氧化法、DMSO氧化法、血晶素氧化法。

10.根据权利要求1或9所述的一种芋螺抗皱素的制备方法，其特征在于，所述环化时环化液体系中的氧化剂选自空气、1％～10％的DMSO水溶液、10％～20％的血晶素中的一种。