[发明专利]一种芋螺抗皱素的制备方法

说明书

本发明涉及多肽药物制备技术领域，公开了一种芋螺抗皱素的制备方法，该方法包括以下步骤：在固相载体上，按照芋螺抗皱素肽序采用固相合成方法得到芋螺抗皱素全保护肽树脂；芋螺抗皱素全保护肽树脂经裂解试剂裂解，得到芋螺抗皱素线性肽；芋螺抗皱素线性肽经环化液环化后，得到芋螺抗皱素粗品，其中，环化液体系的pH范围为5～7.9；芋螺抗皱素粗品经纳微PS40柱纯化、转盐、浓缩、冷冻干燥，得到醋酸芋螺抗皱素。本发明工艺通过选择合适的裂解体系、环化体系和纯化体系，可以有效解决Cys在裂解及环化过程中发生的Cys‑EDT加成副反应、氧化降解聚合副反应、纯化制备上样堵柱三方面问题，是一种具有广泛的实用价值和应用前景的芋螺抗皱素制备方法。

技术领域

本发明涉及多肽药物制备技术领域，特别涉及一种芋螺抗皱素的制备方法。

背景技术

芋螺毒素(conotoxin)由海洋软体动物芋螺(Conus)的毒腺分泌，是12-20个氨基酸长度的小肽毒素分子，主要是一些对多种离子通道和神经受体具有高度专一性的活性多肽，能特异性地作用于乙酰胆碱受体及其他神经递质的各种受体亚型，及钙、钠、钾等多种离子通道。根据芋螺毒素基因及其前体蛋白信号肽的保守性，可将芋螺毒素分为A、O、T、M、P、I等多个超家族；根据毒素作用于生物体内的不同靶位可分为α、ω、μ、δ等多种亚型。

芋螺抗皱素(或μ-芋螺毒素Cn IIIC，来自超M家族)是一种经过排序、人工合成的高度折叠的胜肽，以高亲和力和特异性靶向多样的分子实体，模拟芋螺毒素，穿透力强，稳定性高，目标性的针对肌肉达到放松的作用。μ-芋螺毒素家族的特征是保守的半胱氨酸模式，导致受限的三级结构，并导致与钠通道的相互作用。大多数μ-芋螺毒素优先靶向肌肉型电压门控钠通道(VGSC)，对神经元VGSC的选择性较低。芋螺抗皱素的作用靶点为细胞表达重组钠通道-肌肉型钠离子阀门通道Nav1.4(骨骼肌)，与受体紧密结合，调控突触信号，产生传导阻滞作用，使电信号无法传递至肌肉及节细胞，导致神经肌肉系统功能丧失，阻止肌肉收缩，从而让肌肉放松下来。

芋螺抗皱素具有非常强效的肌肉松弛作用，从而达到即时的抗皱效果，更高效地抑制动态纹。在各种抗衰老的个人护理品中均可应用。在护肤品配方中，加入如精华液、乳液、面霜及面膜等，从而达到祛除深层皱纹的理想效果。加入眼部护理中可明显去除眼周皱纹和眼角鱼尾纹；面部护理中可明显去除由于肌肉收缩而产生的抬头纹、法令纹等。

芋螺抗皱素，英文名为Mu-conotoxin，具体肽序如下：Pyr¹-Gly²-Cys³-Cys⁴-Asn⁵-Gly⁶-Pro⁷-Lys⁸-Gly⁹-Cys¹⁰-Ser¹¹-Ser¹²-Lys¹³-Trp¹⁴-Cys¹⁵-Arg¹⁶-Asp¹⁷-His¹⁸-Ala¹⁹-Arg²⁰-Cys²¹-Cys²²-CONH₂,Cyclic(3→15),(4→21),(10→22)tris(disulfide)

目前获取芋螺毒素的方法主要有3种：从野生芋螺毒管中直接分离获得；通过转基因生物法合成；采用固相多肽合成法合成。其中，天然产物提取产量受限，从芋螺体内直接分离提取芋螺毒素的工艺复杂，提取困难，成本高；生物法合成工艺并不成熟，两者均难以实现芋螺毒素的产业化，并不能满足市场的需求。因此，需要通过固相多肽合成法大量合成，降低成本，以此满足科研用途及日益增长的市场需求。