[发明专利]一种新型冠状病毒S1-E疫苗及其制备方法有效
| 申请号： | 202110717226.3 | 申请日： | 2021-06-28 |
| 公开（公告）号： | CN113633763B | 公开（公告）日： | 2023-04-28 |
| 发明（设计）人： | 左建宏;黄佳璐;张豫;张明慧 | 申请（专利权）人： | 南华大学 |
| 主分类号： | A61K39/215 | 分类号： | A61K39/215;A61K39/39;A61P31/14;C07K14/165;C07K1/22;C12N15/50;C12N15/70 |
| 代理公司： | 武汉知产时代知识产权代理有限公司 42238 | 代理人： | 郝明琴 |
| 地址： | 421001 *** | 国省代码： | 湖南;43 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 新型 冠状病毒 s1 疫苗 及其 制备 方法 | ||
1. 一种新型冠状病毒S1-E疫苗，其特征在于：包括S1-E蛋白，所述S1-E蛋白的编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
2. 如权利要求1所述的一种新型冠状病毒S1-E疫苗，其特征在于：所述S1-E蛋白的浓度为0.1-0.2 mg/mL。
3. 如权利要求1所述的一种新型冠状病毒S1-E疫苗，其特征在于：所述S1-E蛋白由新型冠状病毒突刺蛋白S1亚基位点的受体结合域融合包膜蛋白E而成，所述S1亚基位点的受体结合域的氨基酸序列如SEQID NO:2所示，所述包膜蛋白E的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示，所述S1-E蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示。
4.一种如权利要求1所述的新型冠状病毒S1-E疫苗的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
S1、合成如权利要求1所述的S1-E蛋白的编码基因的核苷酸序列；
S2、将步骤S1得到的S1-E蛋白的编码基因克隆到质粒载体中；
S3、将步骤S2的质粒载体转化到表达系统；
S4、将步骤S3构建的表达系统的生物接种培养，进行重组S1-E蛋白表达，得到所述S1-E蛋白；
S5、提取纯化步骤S4得到S1-E蛋白；
S6、将步骤S5得到的高纯度的S1-E蛋白与佐剂混合孵育，形成稳定的混合物，沉淀、水洗和冻干，即得所述S1-E疫苗。
5.如权利要求4所述的一种新型冠状病毒S1-E疫苗的制备方法，其特征在于：步骤S2中，所述质粒载体包括质粒pET-28a。
6.如权利要求4所述的一种新型冠状病毒S1-E疫苗的制备方法，其特征在于：步骤S3中，所述表达系统包括原核表达系统、酵母表达系统、哺乳细胞和无细胞表达系统中的任意一种。
7.如权利要求6所述的一种新型冠状病毒S1-E疫苗的制备方法，其特征在于：步骤S3中，所述原核表达系统包括大肠杆菌；步骤S4中，将所述大肠杆菌的菌落接种于含卡那霉素的溶菌肉汤培养基中进行细胞培养，所述大肠杆菌的接种量为1~6%。
8. 如权利要求4所述的一种新型冠状病毒S1-E疫苗的制备方法，其特征在于：步骤S5中的提取过程使用包涵体溶解液，所述包涵体溶解液包括Tris缓冲液、 NaCl溶液和尿素，所述Tris缓冲液和NaCl溶液的摩尔浓度比为5:4，所述尿素的的摩尔浓度为8mol/L；所述纯化使用层析柱，所述层析柱为Ni2+金属螯合层析柱。
9.如权利要求4所述的一种新型冠状病毒S1-E疫苗的制备方法，其特征在于：步骤S6中，所述佐剂包括PLGA，所述PLGA在所述S1-E疫苗中的终浓度为1-2mg/mL。
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