[发明专利]选用新鲜鹿茸提取复合活性多肽的加工方法

说明书

本发明公开了一种选用新鲜鹿茸提取复合活性多肽的加工方法，其包括对鹿茸进行初步清洁去血水去皮毛以及切片等前处理，对切片进行震动灌洗分离细胞悬液和基质残渣，然后分别对细胞悬液和基质残渣进行提取，然后通过酶解形成小分子肽结构更易于吸收，其中，对细胞悬液进行精提，对基质残渣进行多次粗提的方式，提高鹿茸多肽的含量及纯度，同时保留了多种协同增益成分。

技术领域

本发明属于生物技术领域，尤其是一种选用新鲜鹿茸提取复合活性多肽的加工方法。

背景技术

关节病变，是现代人群的常见病，尤其是随着工作状态的转变，上班族们处于长期久坐、工作压力大、长时间熬夜的工作状态，越来越多的人时常会出现关节异响的状况。长久的伏案久坐，容易造成关节间产生的润滑液少，加大关节摩擦的损耗，久而久之，会加重对软骨的磨损，而软骨磨损过度则可能引发退行性关节炎，加重身体的负担。

关节软骨是一种特殊的结缔组织，它覆盖在关节的负重关节面上，关节软骨有维持功能的基质和软骨细胞构成。基质中主要有水、胶原和蛋白多糖。胶原纤维具有很强的张力，而蛋白多糖，是一类大分子蛋白多糖聚合物，大分子的糖蛋白通过吸收与挤出水分来调节所承受的压力，关节腔液起到润滑作用，减少关节软骨表面在运动时的摩擦。

多数人认为关节软骨缺乏独立的再生修复能力，而修复主要靠邻近疏松结缔组织的化生，形成纤维样软骨。但有研究表明，成年人软骨细胞仍保留小的增生能力，关节软骨的基质也能再形成。覆在除关节面以外的骨外表明上的骨外膜包括两层，其外层由致密的结缔组织构成，而其内层则含有幼稚的骨原细胞，该骨原细胞既可以分化为软骨细胞形成软骨，也可以分化为骨细胞形成骨，而这两种分化能力则取决于环境影响。（中华外科杂志1989年第27卷第10期594页，关节软骨缺损修复的研究进展）。

鹿茸为鹿科动物梅花鹿或马鹿的雄鹿密生茸毛的未骨化的幼角,药物分析表明,鲜鹿茸提取物中含有多种具有重要生理活性的物质,如鲜鹿茸胰岛素样生长因子（IGF-1）、鲜鹿茸生长激素（HGH）、鲜鹿茸促生长释放因子（GHRF-6）、鲜鹿茸表皮生长因子(EGF) 、鲜鹿茸神经生长因子（NGF）、鲜鹿茸成纤维生长因子(FGF)等，这类生物活性因子，对人体的伤口愈合、延缓细胞凋亡等具有重要作用。有研究（修忠标，孙磊等．鹿茸多肽对实验性膝骨性关节炎软骨细胞凋亡及相关细胞因子的影响[J]．中国骨伤．2012．25(5)：418-423.）表明：鹿茸多肽（鹿茸多肽是从梅花鹿茸中提取的一种多肽类生物活性因子，为鹿茸的主要活性成分）可抑制膝骨性关节炎过程中软骨细胞凋亡，降低关节液中白细胞介素——lβ和肿瘤坏死因子——α的水平，一定程度上延缓关节软骨的退变。

然而，现有鹿茸多肽的提取方法存在以下不足：

(1)传统的，采用加热、强酸或酶蛋白水解新鲜鹿茸所得到的鹿茸多肽，该方法虽然可以获得含量较高、得率较高的鹿茸多肽，但其制备条件使得所得鹿茸多肽在很大程度上失去了天然生物活性，大大降低了生物应用效果；(2)常规的，采用酸醇法提取分离所得鹿茸多肽，其分子构象、天然特性等较传统方法较多保留、生物学活性也有所提高，但酸醇法所得鹿茸多肽较为粗糙、纯度不高、且含有较多不溶性杂质和皮质类固醇激素及性激素，这些直接应用存在过敏风险和其他副作用等；(3)采用柱层析法或高效液相进一步纯化，虽能得到分子量分布均一性较好、纯度较高、生物活性较好的鹿茸多肽，但其剔除了其它成分、包括具有协同增效的功效成分，使其在实际应用中效果大打折扣；此外，鹿茸多肽在液体中不易保存、且易于降解氧化、生物活性也大大降低。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明提供了一种选用新鲜鹿茸提取复合活性多肽的加工方法，该方法提取的鹿茸多肽具有纯度高，同时还保留了协同增效的其他成分。