[发明专利]分子标签接头及测序文库的构建方法

权利要求书

1.分子标签接头，其特征在于，包括第一接头和第二接头，所述第一接头包括：

第一链，所述第一链包括从5′端依次的第一固定碱基序列、随机碱基序列和第一引物结合序列；

第二链，所述第二链包括从5′端依次的第二固定碱基序列和碱基T；

其中，所述第一链和所述第二链通过所述第一固定碱基序列和所述第二固定碱基序列的反向互补配对而结合；

所述第二接头包括第二引物结合序列，所述第二引物结合序列与所述第一引物结合序列至少部分反向互补；

优选的，所述第一固定碱基序列和所述第二固定碱基序列的长度为6～12nt；

优选的，所述第一固定碱基序列和所述第二固定碱基序列为任意碱基序列；

优选的，所述随机碱基序列的长度为8～16nt。

2.根据权利要求1所述的分子标签接头，其特征在于，所述第一引物结合序列包括从5′端依次的第三固定碱基序列和第四固定碱基序列。

3.根据权利要求2所述的分子标签接头，其特征在于，所述第二引物结合序列包括从5′端依次的第五固定碱基序列和第六固定碱基序列，所述第六固定碱基序列与所述第三固定碱基序列反向互补。

4.根据权利要求3所述的分子标签接头，其特征在于，所述第一引物结合序列为AGATCGGAAGAGCACACGTCTGAACTCCAGTCAC，所述第二引物结合序列为ACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCT；或所述第一引物结合序列为AAGTCGGAGGCCAAGCGGTCTTAGGAAGACAA，所述第二引物结合序列为TTGTCTTCCTAAGGAACGACATGGCTACGATCCGACTT。

5.试剂盒，其特征在于，包括权利要求1至4任一项所述的分子标签接头。

6.测序文库的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

提供模板、建库引物和权利要求3或4所述的分子标签接头；

使第一接头和所述模板接触并相互连接，得到第一连接产物；

使所述第一连接产物与第二接头结合，并开始延伸反应，补齐随机碱基序列在第二链上的互补序列，形成第二连接产物；

使所述第二连接产物中的第二固定碱基序列变性脱落，继续延伸反应，补齐第一固定碱基序列在所述第二链上的互补序列，并与所述模板连接，形成第三连接产物；

使所述第三连接产物与建库引物接触，扩增得到测序文库；

优选的，形成所述第二连接产物过程中的反应温度为10～30℃，形成所述第三连接产物过程中的反应温度为60～72℃。

7.测序文库，其特征在于，采用权利要求6所述的构建方法构建得到。

8.测序方法，其特征在于，采用权利要求7所述的测序文库进行测序。

9.权利要求1所述分子标签接头的制备方法，其特征在于，包括合成第一接头的步骤，所述步骤如下：

合成第一链和第二链；

将所述第一链和所述第二链退火，得到所述第一接头。

10.权利要求1至4任一项所述的分子标签接头在制备检测血浆中循环肿瘤DNA的试剂中的应用。