[发明专利]一种L-赖氨酸脱羧酶SpLDC及其在产1，5-戊二胺上的应用

权利要求书

1.一种L-赖氨酸脱羧酶SpLDC，其特征在于，所述L-赖氨酸脱羧酶SpLDC的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.根据权利要求1所述的L-赖氨酸脱羧酶SpLDC，其特征在于，编码所述L-赖氨酸脱羧酶SpLDC的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

3.一种重组质粒，含有编码权利要求1所述L-赖氨酸脱羧酶SpLDC的核苷酸序列的质粒。

4.一种重组工程菌，表达权利要求3所述重组质粒的菌株。

5.基于权利要求1所述L-赖氨酸脱羧酶SpLDC、权利要求3所述重组质粒或权利要求4所述重组工程菌在催化L-赖氨酸盐酸盐产1，5-戊二胺上的应用。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述L-赖氨酸脱羧酶SpLDC在催化产1,5-戊二胺上的应用，具体步骤如下：

步骤1，通过基因合成L-赖氨酸脱羧酶SpLDC的核苷酸序列，并将该序列插入到载体pETdute-1上，获得重组载体pETdute-SpLDC；

步骤2，将重组载体pETdute-SpLDC转移到大肠杆菌DH5α中，涂在带有氨苄抗性的平板上，待长出菌落，挑取正确的克隆宿主，在LB培养基中进行扩培，使用质粒提取试剂盒提取重组质粒pETdute-SpLDC；

步骤3，将重组质粒pETdute-SpLDC导入大肠杆菌BL21(DE3)，得到含有重组质粒pETdute-SpLDC的大肠杆菌BL21(DE3)，命名为重组菌；

步骤4，挑选重组菌的单克隆，摇床过夜培养后，加入诱导剂诱导培养，收集菌液，离心后，收集沉淀；

步骤5，向沉淀中加入缓冲液重悬菌株，再超声破碎后，离心，收集上清后冷冻备用；

步骤6，采用镍柱纯化方式获得纯酶，使用纯酶对L-赖氨酸盐酸盐进行催化反应，即得1，5-戊二胺溶液。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，步骤6中在催化反应的pH为4.0-9.5都具有催化合成戊二胺的能力；在温度为37-55℃具有较高的催化合成戊二胺的能力。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，步骤6纯酶在pH为5.0-8.0的缓冲中孵育12h，酶任然具有原有的80%以上的催化合成戊二胺的活性，说明改酶具有良好的pH稳定性；纯酶在pH 7，在温度为37℃-52℃的水浴锅放置12 h，检测纯酶催化合成戊二胺的能力任然保持在80% 以上，说明该酶具有良好的温度稳定性。

9.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，步骤6中在催化反应的pH为6.5时，催化效果佳；催化反应的温度为52℃，催化效果佳。