[发明专利]一种提高荧光艾美耳球虫卵囊分选成功率的方法和应用

权利要求书

1.一种提高荧光艾美耳球虫卵囊分选成功率的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将含有转基因艾美耳球虫卵囊的粪便进行球虫分离，得到球虫卵囊液A；

(2)将所述球虫卵囊A进行孢子化，计数，稀释，得到卵囊液B；

(3)将所述卵囊液B静置，置于显微镜下观察，记录含有荧光卵囊的编号及数量，加入饱和食盐水，吹打，静置，得到含有荧光的卵囊；

(4)向所述含有荧光的卵囊中加入水，离心后取沉淀，再进行单卵囊分离，得到目标卵囊；

(5)将所述目标卵囊经口感染SPF鸡进行传代，即得含有转基因艾美耳球虫卵囊；

步骤(2)中，所述孢子化的具体步骤为：将所述球虫卵囊液A转移至装有卵囊培养液的烧杯中，孵育20～24h后孢子化，得到孢子化卵囊液，所述卵囊培养液为重铬酸钾溶液或氯胺T溶液；

步骤(3)中，所述饱和食盐水的加入量为180-220ml，所述吹打的次数为8-12次；

步骤(3)中，还包括将卵囊液B重复步骤(3)8-12次；

步骤(4)中，所述含有荧光卵囊和水的体积比为1：(5～10)；

步骤(5)中，所述SPF鸡为1日龄。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述球虫分离的具体步骤为：S1、将含有转基因艾美耳球虫卵囊的粪便揉碎，加入清水混匀，过滤，得到滤液；S2、向所述滤液中加入清水洗涤，离心，去除上清液，得到沉淀；S3、将所述沉淀加入饱和食盐水或饱和硫酸镁溶液中混匀，离心，收集上清液；S4、将所述上清液加入水中稀释，离心，收集沉淀，即得所述球虫卵囊液A。

3.权利要求1-2任一项所述的方法在转基因球虫疫苗中的应用。