[发明专利]特异性识别猪COL1A1基因的gRNA及其生物材料、试剂盒和应用

权利要求书

1.猪COL1A1基因第51外显子末端定点整合GFP表达框的猪胎儿成纤维细胞系的筛选方法，其特征在于，所述方法包括将基因编辑元件导入猪胎儿成纤维细胞系，转染培养后用流式分选技术分选GFP阳性细胞，并进行junction PCR鉴定；所述猪COL1A1基因第51外显子的靶序列如SEQ ID No.5所示；

所述基因编辑元件包括Cas9/gRNA1表达载体质粒和线性化后的Donor质粒；所述Donor质粒含有COL1A1基因第51外显子同源臂序列以及GFP表达框；

所述gRNA1的核苷酸序列为GAAACUCCCUCCGCCCCAAUC；

所述junction PCR鉴定使用跨左同源臂引物：P1和P2，跨右同源臂引物：P3和P4，所述P1的核苷酸序列为CCTCCTCCTCAGCCACATAG；P2的核苷酸序列为GAACTTCAGGGTCAGCTTGC，P3的核苷酸序列为CGACCACTACCAGCAGAACA，P4的核苷酸序列为GGGAAGAAGAAAGGGTGGAG。