[发明专利]硫代磷修饰适配子、硫代磷修饰适配子偶联T细胞及其制备方法与应用

说明书

本发明提供了一种硫代磷修饰适配子、硫代磷修饰适配子偶联T细胞及其制备方法与应用，所述硫代磷修饰适配子为将适配子5’端末端四个核苷酸间的3个磷酸二酯键进行硫代磷酸化修饰而获得。所述硫代磷修饰适配子偶联T细胞为将所述的硫代磷修饰适配子经DBCO修饰后与表面携带有叠氮基的激活T细胞偶联获得。该硫代磷修饰适配子亲和力高，稳定性高；该硫代磷修饰适配子偶联T细胞可以更好的识别靶细胞，能用于过继靶向治疗和杀伤肿瘤细胞。

技术领域

本发明涉及生物医学技术领域，特别涉及一种硫代磷修饰适配子、硫代磷修饰适配子偶联T细胞及其制备方法与应用。

背景技术

核酸适配子(aptamer)是一种基于SELEX技术筛选获得的单链DNA或RNA(通常是25-90个核苷酸碱基)，亦被称为“核酸抗体”，可通过折叠成三级结构与靶分子结合,在功能上被用作拮抗剂，激动剂或靶向配体。适配子本质是一种可以特异性结合某些糖表位，多肽，金属离子等分子的寡核苷酸片段。以目的分子或者细胞为结合靶点，通过指数富集的配体系统进化技术(systematic evolution of ligands by exponential enrichment，SELEX)筛选得到。适配子最大的优点在于，一，合成成本低，合成速度快，可大量合成。二，分子量小，代谢速度快，渗透性强。三，免疫原性低，有较强抵抗高温，PH变化和有机溶剂破坏的能力，且能根据实际需要对其加以修饰。适配子的这些特性使其在诊断治疗等生物医学领域具有极大的应用潜能，基于这些优势，适配子的研究项目在日益增多，获得的适配子可广泛用于生物诊断，生物标志物发现，体分子成像，靶向治疗和药物递送。美国食品药品管理局(FDA)批准了第一个适配体药物pegaptanib(商品名Macugen)用于治疗老年性黄斑变性新型血管形成(AMD)，标志适配子药物正式进入临床治疗。

然而现有的核酸适配子的稳定性尚有待提高，因此有必要开发一种稳定性高的核酸适配子及其靶向T细胞。

发明内容

本发明目的是提供一种硫代磷修饰适配子、硫代磷修饰适配子偶联T细胞及其制备方法与应用，该硫代磷修饰适配子亲和力高，稳定性高；该硫代磷修饰适配子偶联T细胞可以更好的识别靶细胞，能用于过继靶向治疗和杀伤肿瘤细胞。

在本发明的第一方面，提供了一种硫代磷修饰适配子，所述硫代磷修饰适配子为将适配子的5’端末端四个核苷酸间的3个磷酸二酯键进行硫代磷酸化修饰而获得。

进一步地，所述硫代磷修饰适配子包括硫代磷修饰的PDL1适配子，其中所述PDL1适配子的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

进一步地，所述硫代磷修饰适配子还包括：在所述适配子的核苷酸序列上结合生物素、地高辛、荧光物质、纳米发光材料、聚乙二醇和叶酸标记中的至少一种。

在本发明的第二方面，提供了一种硫代磷修饰适配子偶联T细胞，所述硫代磷修饰适配子偶联T细胞为：将所述的硫代磷修饰适配子经DBCO修饰后与表面携带有叠氮基的激活T细胞偶联获得。

在本发明的第三方面，提供了一种硫代磷修饰适配子偶联T细胞的制备方法，所述方法包括：

将所述的硫代磷修饰适配子采用DBCO进行修饰，获得DBCO-硫代磷修饰的适配子；

通过糖代谢途径在CD3⁺T细胞表面表达叠氮键，获得表面携带有叠氮基的激活T细胞；

将所述DBCO-硫代磷修饰的适配子与所述表面携带有叠氮基的激活T细胞进行偶联，获得硫代磷修饰适配子偶联T细胞。

进一步地，所述将所述的硫代磷修饰适配子采用DBCO进行修饰，获得DBCO-硫代磷修饰的适配子，包括：

采用硫代磷酸化引物对适配子5’端末端四个核苷酸间的3个磷酸二酯键进行硫代磷酸化修饰，获得硫代磷修饰适配子；