[发明专利]标记黄瓜嫩果皮色基因的引物、基因序列、检测方法及应用

权利要求书

1.一种标记黄瓜嫩果皮色基因的引物，其特征在于，所述引物具体为：

Csw-CAPS_F：核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；

Csw-CAPS_R：核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

2.一种黄瓜嫩果皮色的检测方法，其特征在于，利用权利要求1所述的标记黄瓜嫩果皮色基因的引物。

3.如权利要求2所述的黄瓜嫩果皮色的检测方法，其特征在于，采用PCR扩增加酶切的方法检测判定，具体包括如下步骤：

(1)提取待测品种基因组DNA；

(2)以步骤(1)中所提取的基因组DNA为模板，利用所述标记黄瓜嫩果皮色基因的引物进行PCR扩增得到PCR产物，对所述PCR产物进行内切酶FauI的酶切，然后进行8％丙烯酰胺凝胶电泳检测和/或测序；

(3)依据步骤(2)的电泳条带和/或测序结果进行判定。

4.如权利要求3所述的黄瓜嫩果皮色的检测方法，其特征在于，基于PCR产物酶切后的电泳结果判定：

如果电泳条带仅有一种128bp，判定待测品种为白色果皮品种；

如果电泳条带仅有一种150bp带型，判定待测品种为绿色果皮品种；

如果电泳条带有150bp和128bp两种带型，判定待测品种为杂合型的绿色果皮品种。

5.如权利要求4所述的黄瓜嫩果皮色的检测方法，其特征在于，128bp特征条带的具体碱基序列为：SEQ ID NO.3；150bp特征条带的具体碱基序列为：SEQ ID NO.4。

6.如权利要求3所述黄瓜嫩果皮色的检测方法，其特征在于，所述步骤(1)中，采用CTAB法提取其基因组DNA。

7.如权利要求3所述黄瓜嫩果皮色的检测方法，其特征在于，所述步骤(2)中，PCR扩增时，10μL扩增体系设计如下：

基因组DNA，2μL；

Csw-CAPS_F，0.5μL；

Csw-CAPS_R，0.5μL；

2×TaqMix，5.0μL；

ddH₂O，2.0μL；

PCR扩增程序为：

第一程序：94℃、3min；

第二程序：94℃、20s，68℃、20s，72℃、30s；并依次按94℃、20s，68℃(每循环降2℃)、20s，72℃、30s的顺序走6个循环；

第三程序：94℃、20s，58℃、20s，72℃、30s；并依次按94℃、20s，58℃(每循环降1℃)、20s，72℃、30s的顺序走8个循环；

第四程序：94℃、20s，50℃、20s，72℃、30s；并依次按94℃、20s，50℃、20s，72℃、30s的顺序走20个循环；

第五程序：72℃、5min。

PCR产物酶切时，10μL酶切体系设计如下：

PCR产物，2μL；

FauI，0.2μL；

10×CuCSmaCCC BuffeC，1μL；

ddH₂O，6.8μL；

酶切程序为55℃，2h。

8.如权利要求2所述的黄瓜嫩果皮色的检测方法，其特征在于，采用PCR扩增的方法检测判定，具体为提取待测品种基因组DNA，并以品种基因组DNA为模板，利用所述引物进行PCR扩增得到PCR产物，然后对PCR产物进行测序及判定；

基于PCR产物的测序结果判定：

如果基于测序结果为一种且与SEQ ID NO.4相同，判定待测品种为绿色果皮品种；

如果基于测序结果为一种且与SEQ ID NO.5相同，判定待测品种为白色果皮品种；

如果基于测序结果为两种且与SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5相同，判定待测品种为杂合型的绿色果皮品种。

9.一种黄瓜嫩果皮色基因的标记基因序列，其特征在于，具体为SEQ ID NO.3、SEQ IDNO.4和SEQ ID NO.5，用于判定黄瓜嫩果皮色品种。

10.一种鉴定黄瓜嫩果皮色的试剂盒，其特征在于，包括如权利要求1所述的标记黄瓜嫩果皮色基因的引物。