[发明专利]标记黄瓜嫩果皮色基因的引物、基因序列、检测方法及应用

说明书

本发明公开了标记黄瓜嫩果皮色基因的引物、基因序列、检测方法及应用，引物具体为：Csw‑CAPS_F：核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；Csw‑CAPS_R：核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。标记黄瓜嫩果皮色基因的引物与黄瓜嫩果白色果皮调控基因w(apCC2)共分离，利用该引物来检测判断黄瓜嫩果绿色和白色果皮性状，该引物可直接用于黄瓜嫩果皮色遗传改良的分子标记辅助选择，具有简便、快捷和高通量的优势，且准确性高达100％，在黄瓜嫩果皮色遗传改良和育种中具有很好的实际应用价值。

技术领域

本发明属于植物遗传育种技术领域，具体涉及一种标记黄瓜嫩果皮色基因的引物、基因序列、检测方法及应用。

背景技术

黄瓜(Cucumis sativus L.)是葫芦科黄瓜属一年生蔓性植物，也是我国重要的蔬菜作物之一，嫩果果皮颜色是其重要的外观品质性状。目前市场上主栽黄瓜品种以绿皮品种为主，且多为深绿色，而白色果皮的黄瓜品种较少。随着人们消费需求的多元化，白果皮等特色黄瓜品种越来越受到人们的青睐，黄瓜果皮颜色的遗传改良逐渐成为黄瓜外观品质育种的重要目标之一。针对白色果皮性状，开发与黄瓜嫩果白色果皮基因连锁的分子标记，结合分子标记辅助选择，进行不同类型白果皮黄瓜种质的遗传改良，对特异白果皮黄瓜新品种的选育具有重要意义。

黄瓜果皮颜色比较丰富，主要分为嫩果和成熟果果皮颜色。黄瓜嫩果果皮颜色来源于叶绿体及色素母细胞中叶绿素和类胡萝卜素(孙小镭等2003)，包括墨绿、深绿、绿、黄绿、浅绿色、白绿、黄白和白色等类型(Pierce and Wehner 1990)。随着果实的成熟，果皮中胡萝卜素和花青素等色素逐渐积累，呈现出其它新的颜色，如黄色、橙色、砖红色和红色等(Dong et al.2012)。黄瓜嫩果果皮颜色形成影响因素较多，调控机制较复杂，除受果皮中色素种类和含量直接决定外，果皮表面的蜡质、网纹、光泽、果瘤和刺，以及光照和温度等环境因素也会引起黄瓜嫩果皮色的变化(刘汉强2018)。Cochran(1938)将白色果皮黄瓜嫩果与绿色果皮黄瓜嫩果进行杂交，发现F₁代果皮全为绿色，判断出黄瓜嫩果白色果皮相对于绿色果皮为隐性性状。孙晓丹等(2011)和董邵云等(2012)均报道白色果皮颜色由1对隐性基因“ww”控制，且深绿色显性于白色。Liu等(2016)利用Q24与Q30杂交产生的9497株F₂对w基因进行精确定位，成功w基因定位在3号染色体8.2kb的范围内，候选区间内仅一个目的基因aprr2。候选基因的DNA和cDNA克隆及序列比对分析表明，白皮基因w(aprr2)是由绿皮基因W(APRR2)的单碱基插入导致移码突变，使得白皮材料相对于绿皮材料缺失了101个氨基酸突变(Liu et al.2016)。绿果皮亲本中APRR2基因的表达量，随果实的生长发育，呈现升高后下降的趋势，而白果皮亲本材料中该基因表达量始终保持在较低水平，该基因除在果皮中差异表达外，在叶中表达差异也极显著。白色与绿色黄瓜嫩果果皮颜色的差异是由于W(APRR2)基因突变后，叶绿体的发育受到不良影响，导致叶绿体数目减少，叶绿体结构不完整，进而导致叶绿素不能正常合成，从而表现白色(Liu et al.2016)。

发明内容

本发明的目的是提供一种标记黄瓜嫩果皮色基因的引物、基因序列、检测方法及应用，为利用分子标记辅助选择，进行黄瓜嫩果皮色的遗传改良奠定基础。

本申请所采取的技术方案详述如下：

一种标记黄瓜嫩果皮色基因的引物，引物具体为：

Csw-CAPS_F：核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；

Csw-CAPS_R：核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

一种黄瓜嫩果皮色的检测方法，本发明公开的标记黄瓜嫩果皮色基因的引物。

优选的，采用PCR扩增加酶切的方法检测判定，具体包括如下步骤：

(1)提取待测品种基因组DNA；