[发明专利]一种土壤中马兜铃酸的检测方法

说明书

本发明涉及分析化学及环境检测技术领域，具体涉及一种土壤中马兜铃酸的检测方法，特别涉及一种分散固相萃取‑液相色谱串联质谱联用测定土壤中马兜铃酸的高灵敏度检测方法。本发明提供的土壤中马兜铃酸的检测方法，采用分散固相萃取‑液相色谱串联质谱法技术；其中所述分散固相萃取的提取溶剂为0.1‑2％乙酸乙腈。本发明选择乙酸乙腈作为提取溶剂，对马兜铃酸具有特异选择性，既能够最大程度提高马兜铃酸的提取率，又可以避免土壤中较多杂质随之进入提取液中，提高后续检测的准确性；而且该提取溶剂还同时兼具仪器响应值高、灵敏度高及提取效率高的优势。

技术领域

本发明涉及分析化学及环境检测技术领域，具体涉及一种土壤中马兜铃酸的检测方法，特别涉及一种分散固相萃取-液相色谱串联质谱联用测定土壤中马兜铃酸的高灵敏度检测方法。

背景技术

马兜铃酸(Aristolochic acids，AAs)是一种硝基菲类化合物，主要含马兜铃酸I(AA-I)和马兜铃酸II(AA-II)两种成分。马兜铃酸广泛存在于马兜铃科马兜铃属Aristolochia及细辛属Asarum等植物中，具有肾毒性、致癌和致基因突变等毒性。

当前含马兜铃酸的中药(如马兜铃、防己、青木香、天仙藤等)仍有种植，其茎叶、果实、残根等散落、遗留到土壤中，势必会造成土壤中马兜铃酸残留。因此，有必要建立土壤中马兜铃酸的快速准确检测方法，以确保环境和食品质量安全。

目前样品中马兜铃酸的检测手段主要采用液相色谱法(HPLC)、液相色谱串联质谱法(LC-MS/MS)、毛细管电泳法、电化学法等；但这些检测方法的检测对象多集中在中药及中成药制剂等马兜铃酸含量相对较高的药品中。对于痕量甚至超痕量的马兜铃酸的检测，目前报道较少。

发明内容

本发明的目的是提供一种土壤中马兜铃酸的检测方法。该方法具有简便快速、灵敏度高、适用性强、环境友好的优点，可以满足中药种植区不同类型土壤中痕量马兜铃酸的检测需求。

本发明提供的土壤中马兜铃酸的检测方法，采用分散固相萃取-液相色谱串联质谱法技术；其中所述分散固相萃取的提取溶剂为0.1-2％乙酸乙腈。

现有关于中药制品中马兜铃酸的提取试剂种类较多，例如氯仿、甲醇等，可通过不同提取试剂的组合以满足不同样品提取体系的提取效果；但由于土壤样品与中药制品的提取体系相差较大，目前公开的提取试剂组合并不适用于土壤中痕量马兜铃酸的检测。

而目前常用的土壤中痕量有机物的提取主要采用加速溶剂萃取或者索氏提取的方法，采用的有机溶剂有二氯甲烷、正己烷、丙酮等，但由于试剂用量大而且提取杂质多，需要进一步采用固相萃取柱进行净化，存在整个前处理过程步骤繁琐、耗时长、易污染环境、检测准确性低等问题。

因此，如何选择合适的提取溶剂，既能有效地从土壤中提取马兜铃酸有效成分，又能较少地提取土壤中杂质，同时又对环境污染较小，成为土壤中痕量马兜铃酸检测的技术难题之一。

本发明通过大量试验发现，与土壤常规提取溶剂如二氯甲烷、正己烷、丙酮等有机溶剂相比，乙腈不易于与非极性物质互溶，可避免土壤中一些油脂等非极性杂质被提出，显著减少提取溶液中杂质相对含量；而进一步添加乙酸后，乙酸乙腈作为提取溶剂对马兜铃酸具有特异选择性，既能够最大程度提高马兜铃酸(特别是对AAII)的提取率，又可以避免土壤中较多杂质随之进入提取液中，提高后续检测的准确性；同时乙酸的加入还可以作为马兜铃酸的保护剂，有利于维持马兜铃酸在提取溶剂中的稳定性；此外，该提取溶剂还同时兼具仪器响应值高、灵敏度高及提取效率高的优势。优选地，所述分散固相萃取的提取溶剂为0.5-2％乙酸乙腈，进一步优选1％乙酸乙腈。

优选地，所述乙酸乙腈与土壤样品的比例为2-3mL：1g。研究表明，通过控制二者的合理比例，既能保证提取效果，同时又避免试剂浪费。