[发明专利]气血和胶囊的质量检测方法

权利要求书

1.一种气血和胶囊的质量检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤(1)混合对照品溶液的制备

精密称取芍药苷、柚皮苷、新橙皮苷、丹酚酸B、藁本内酯对照品适量，分别加甲醇制备成芍药苷、柚皮苷、新橙皮苷、丹酚酸B、藁本内酯单一对照品储备液；精密吸取上述储备液适量，混合后加甲醇稀释，得到混合对照品溶液；

步骤(2)供试品溶液的制备

取气血和胶囊，去掉胶囊外壳，精密称定内容物，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇，密塞，称定重量，超声处理，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，续滤液过微孔滤膜，制得供试品溶液；

步骤(3)线性回归方程的建立

取步骤(1)的混合对照品依次稀释5倍，得到系列浓度的对照品溶液，依次注入HPLC，以系列对照品浓度作为横坐标X，对应的峰面积为纵坐标Y，对各化学成分进行线性回归分析并计算线性回归方程；

步骤(4)含量测定

取步骤(2)的气血和胶囊供试品溶液注入HPLC进行分析，将峰面积代入步骤(3)的线性回归方程，计算供试品溶液中芍药苷、柚皮苷、新橙皮苷、丹酚酸B、藁本内酯成分的含量；

步骤(5)指纹图谱的建立

将步骤4中供试品溶液的指纹图谱导出，并导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统2012版；以气血和胶囊S6的指纹图谱为参照图谱，以中位数法生成对照图谱，时间窗宽度为0.1s，经过多点校正及自动匹配后生成5个共有峰的气血和胶囊指纹图谱和对照指纹图谱；并根据混合对照品溶液色谱图的保留时间标注对照指纹图谱中峰的化学成分；

所述的步骤(3)和步骤(4)中的HPLC的色谱条件为：

采用Waters SunFire C₁₈色谱柱，规格4.6mm×150mm，5μm；流动相为：甲醇为A相-0.2％甲酸水为B相，进行梯度洗脱；流速1.0mL·min^-1；检测波长280nm、235nm；柱温30℃，进样量20μL；

所述的梯度洗脱方式为：0～10min，10％A→25％A；10～20min，25％A→30％A；20～25min，30％A→32％A；25～35min，32％A→34％A；35～40min，34％A→38％A；40～45min，38％A→45％A；45～55min，45％A→58％A；55～60min，58％A→58％A；60～65min，58％A→68％A；65～75min，68％A→90％A；75～78min，90％A→10％A；78～80min，10％A→10％A。

2.根据权利要求1所述的气血和胶囊的质量检测方法，其特征在于，

步骤(1)混合对照品溶液的制备

精密称取芍药苷、柚皮苷、新橙皮苷、丹酚酸B、藁本内酯对照品适量，分别加甲醇制备成芍药苷、柚皮苷、新橙皮苷、丹酚酸B、藁本内酯单一对照品储备液；精密吸取上述储备液适量，混合后加甲醇稀释，制成每1mL含芍药苷0.250mg、柚皮苷0.200mg、新橙皮苷0.100mg、丹酚酸B0.250mg、藁本内酯0.200mg的混合对照品溶液。

3.根据权利要求1所述的气血和胶囊的质量检测方法，其特征在于，步骤(2)供试品溶液的制备方法为：

取10批次气血和胶囊，去掉胶囊外壳，精密称定内容物1.0g，置具塞锥形瓶中，精密加入25mL甲醇，密塞，称定重量，功率400W，频率80KHZ超声处理，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，续滤液用0.22μm的微孔滤膜过滤，制得供试品溶液。

4.根据权利要求1所述的气血和胶囊的质量检测方法，其特征在于，步骤(5)通过HPLC将各对照品的保留时间与各药材的指纹图谱对照，指认出5个共有峰分别是1号峰芍药苷、2号峰柚皮苷、3号峰新橙皮苷、4号峰丹酚酸B、5号峰藁本内酯。

5.根据权利要求1所述的气血和胶囊的质量检测方法，其特征在于，步骤(3)中建立的标准曲线为：

成分	回归方程	r	线性范围μg/mL
芍药苷	y＝24784x-59263	0.9999	7.8125-250
柚皮苷	y＝30425x-13282	0.9999	6.25-200
新橙皮苷	y＝39424x-36032	0.9998	3.125-100
丹酚酸B	y＝7868.5x-16625	0.9999	7.8125-250
藁本内酯	y＝21701x-36214	0.9999	6.25-200

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