[发明专利]一种基于三维DNA Walker和滕氏蓝的双信号miRNA-21检测方法

权利要求书

1.一种基于三维DNA Walker和MOF-Fe(II)诱导滕氏蓝生成的双信号miRNA-21检测方法，其特征在于：

包含以下步骤：

1)将亲和素修饰的MB与生物素修饰的发夹链H₁混合孵育后，所得产物与发夹链H₂-AuNP-GOx探针及miRNA-21溶液混合孵育，得到DNA Walker产物；在葡萄糖溶液中加入所述DNAWalker产物进行催化反应，磁性分离DNA Walker产物，得到含过氧化氢的溶液；

2)在电极表面滴加MOF-Fe(II)分散液，干燥，再在电极表面滴加所述含过氧化氢的溶液，进行孵育，再在电极表面滴加铁氰化钾溶液，进行反应，反应完成后，将电极置于缓冲溶液中进行电化学检测，得到电流响应值；

3)将一系列不同浓度的标准miRNA-21溶液替换步骤1)中的miRNA-21溶液进行步骤1)和步骤2)，得到一系列电流响应值，并构建miRNA-21浓度与电流响应值之间的标准曲线；

4)将待测miRNA-21溶液替换步骤1)中的miRNA-21溶液进行步骤1)和步骤2)，获得相应电流响应值，并根据标准曲线计算待测miRNA-21溶液的浓度；

或者，

包含以下步骤：

I)将亲和素修饰的MB与生物素修饰的发夹链H₁混合孵育后，所得产物与发夹链H₂-AuNP-GOx探针及miRNA-21溶液混合孵育，得到DNA Walker产物；在葡萄糖溶液中加入所述DNAWalker产物进行催化反应，磁性分离DNA Walker产物，得到含过氧化氢的溶液；

II)在MOF-Fe(II)分散液中所述含过氧化氢的溶液，进行孵育，再加入铁氰化钾溶液，进行反应，反应完成后，进行光热检测，得到温度响应值；

III)将一系列不同浓度的标准miRNA-21溶液替换步骤I)中的miRNA-21溶液进行步骤I)和步骤2)，得到一系列温度响应值，并构建miRNA-21浓度与温度响应值之间的标准曲线；

IV)将待测miRNA-21溶液替换步骤I)中的miRNA-21溶液进行步骤I)和步骤II)，获得相应温度响应值，并根据标准曲线计算待测miRNA-21溶液的浓度。

2.根据权利要求1所述的一种基于三维DNA Walker和MOF-Fe(II)诱导滕氏蓝生成的双信号miRNA-21检测方法，其特征在于：亲和素修饰的MB与生物素修饰的发夹链H₁混合后，在30～40℃温度，孵育20～40min，所得产物与发夹链H₂-Au NP-GOx探针及miRNA-21溶液混合后，在30～40℃下继续孵育1.0～2h。

3.根据权利要求1所述的一种基于三维DNA Walker和MOF-Fe(II)诱导滕氏蓝生成的双信号miRNA-21检测方法，其特征在于：亲和素修饰的MB与生物素修饰的发夹链H₁混合比例为4～6g:1～3μmol。

4.根据权利要求1所述的一种基于三维DNA Walker和MOF-Fe(II)诱导滕氏蓝生成的双信号miRNA-21检测方法，其特征在于：所述MOF-Fe(II)通过以下方法制备得到：将醋酸亚铁水溶液加入到2-氨基对苯二甲酸的DMF溶液中混合均匀后，转入高压釜内，进行溶剂热反应。

5.根据权利要求4所述的一种基于三维DNA Walker和MOF-Fe(II)诱导滕氏蓝生成的双信号miRNA-21检测方法，其特征在于：

醋酸亚铁与2-氨基对苯二甲酸的摩尔比为1:1～1.2；

所述溶剂热反应的条件为：在40～60℃温度下，反应0.5～1.5小时。

6.根据权利要求4所述的一种基于三维DNA Walker和MOF-Fe(II)诱导滕氏蓝生成的双信号miRNA-21检测方法，其特征在于：在葡萄糖溶液中加入DNA Walker产物进行催化反应的时间为20～40min。