[发明专利]一种基于三维DNA Walker和滕氏蓝的双信号miRNA-21检测方法

说明书

本发明公开了一种基于三维DNA Walker和MOF‑Fe(II)诱导滕氏蓝生成的双信号miRNA‑21检测方法。该方法是将亲和素修饰的MB与生物素修饰的发夹链Hsubgt;1/subgt;混合孵育后，再与发夹链Hsubgt;2/subgt;‑Au NP‑GOx探针及miRNA‑21溶液混合孵育，得到DNA Walker产物；在葡萄糖溶液中加入DNA Walker产物进行催化反应，磁性分离，得到含过氧化氢的溶液；再利用MOF‑Fe(II)与含过氧化氢的溶液反应并在电极诱导TB生成，以实现电化学检测，或者利用MOF‑Fe(II)含过氧化氢的溶液并在溶液中诱导TB生成，以实现光热检测，从而可以用于miRNA的双信号检测，且对miRNA目标物检测下限低、选择性高。

技术领域

本发明涉及一种miRNA-21的检测方法，具体是一种基于三维DNA Walker和MOF-Fe(II)诱导滕氏蓝即时生成的双信号miRNA-21检测方法，属于电化学和光热生物分析领域。

背景技术

MicroRNA(miRNA)是一类短的非编码序列，长度为18～25个核苷酸，其在各种生物过程中发挥着至关重要的作用，例如：基因表达、转录、细胞增殖、分化、凋亡和造血作用。此外，miRNA的异常表达将导致癌症的形成、侵袭和转移。近年来，报道的许多与生物分析相结合的分析方法已成功用于miRNA快速定量或半定量分析，包括电化学、荧光、比色、表面等离子体共振和基于电化学发光的生物分析等。与其他方法相比，基于电化学和温度型的传感平台具有简单、低成本和高灵敏度等明显的优势，可实现miRNA的灵敏检测，但是现有技术中利用三维DNA Walker和MOF-Fe(II)诱导滕氏蓝生成同时实现miRNA-21电化学和光热检测方法还未见报道。

发明内容

为克服现有技术的不足与缺陷，本发明的目的是在于提供一种基于三维DNAWalker和 MOF-Fe(II)诱导滕氏蓝生成的双信号miRNA-21检测方法，该方法基于miRNA-21与发夹链H₁的杂交反应，巧妙设计了DNA Walker信号扩增、GOx催化葡萄糖生成H₂O₂以及借助 MOF-Fe(II)的自牺牲原位生成滕氏蓝(TB)的信号转导策略，以实现对miRNA-21的高灵敏度、高选择性的双信号检测。

为了实现上述技术目的，本发明提供了一种基于三维DNA Walker和MOF-Fe(II)诱导滕氏蓝生成的双信号miRNA-21检测方法，可以通过电化学检测方法实现或者通过光热检测方法实现；

电化学检测方法包含以下步骤：

1)将亲和素修饰的MB与生物素修饰的发夹链H₁混合孵育后，所得产物与发夹链H₂-Au NP-GOx探针及miRNA-21溶液混合孵育，得到DNA Walker产物；在葡萄糖溶液中加入所述DNA Walker产物进行催化反应，磁性分离DNA Walker产物，得到含过氧化氢的溶液；

2)在电极表面滴加MOF-Fe(II)分散液，干燥，再在电极表面滴加所述含过氧化氢的溶液，进行孵育，再在电极表面滴加铁氰化钾溶液，进行反应，反应完成后，将电极置于缓冲溶液中进行电化学检测，得到电流响应值；

3)将一系列不同浓度的标准miRNA-21溶液替换步骤1)中的miRNA-21溶液进行步骤 1)和步骤2)，得到一系列电流响应值，并构建miRNA-21浓度与电流响应值之间的标准曲线；

4)将待测miRNA-21溶液替换步骤1)中的miRNA-21溶液进行步骤1)和步骤2)，获得相应电流响应值，并根据标准曲线计算待测miRNA-21溶液的浓度；

或者，

光热检测方法包含以下步骤：