[发明专利]一种防治莲雾果实拟盘多毛孢果腐病及炭疽病的纳米银复合芽孢杆菌菌剂及其制作方法

权利要求书

1.一种防治莲雾果实拟盘多毛孢果腐病及炭疽病的纳米银复合芽孢杆菌菌剂，其特征在于，包括纳米银复合芽孢菌菌悬液，所述纳米银复合芽孢菌菌悬液包括以下重量份的原料：枯草芽孢杆菌1～3份、解淀粉芽孢杆菌0.5～1.5份；所述纳米银复合芽孢菌菌悬液使用硝酸银溶液调节浓度为2-3mmol/L，所述枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.5953，菌株号BLG010，所述解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.10273，菌株号HW05。

2.如权利要求1所述的防治莲雾果实拟盘多毛孢果腐病及炭疽病的纳米银复合芽孢杆菌菌剂，其特征在于，包括以下重量份的原料：纳米银复合芽孢菌菌悬液94-96份，瓜尔豆胶2-2.5份，脂肪醇聚氧乙烯醚0.8-1.5份，聚乙烯吡咯烷酮1-1.5份，蓖麻油聚氧乙烯醚0.2-0.3份，环丙嘧啶醇0.8-1.5份。

3.如权利要求1所述的防治莲雾果实拟盘多毛孢果腐病及炭疽病的纳米银复合芽孢杆菌菌剂，其特征在于，所述纳米银复合芽孢菌菌悬液包括以下重量份的原料：有机发酵营养基30～40份、无机发酵营养基10～20份、蒸馏水950～1050份。

4.如权利要求1所述的防治莲雾果实拟盘多毛孢果腐病及炭疽病的纳米银复合芽孢杆菌菌剂，其特征在于，含有有机发酵营养基，所述有机发酵营养基按重量份包括以下原料组成：木薯粉6-8份、豆粕5-7份、氨基酸4-5份、酵母粉3-4.5份、海藻精3-6份、鱼蛋白粉5-8份、红糖5-7.5份。

5.如权利要求1所述的防治莲雾果实拟盘多毛孢果腐病及炭疽病的纳米银复合芽孢杆菌菌剂，其特征在于，含有无机发酵营养基，所述无机发酵营养基按重量份包括以下原料组成：磷酸二铵10-15份、硝酸钾1-2份、硫酸锌3-5份、硫酸镁2-3份、钼酸铵0.05-0.1份、氯化钠0.5-1份。

6.如权利要求1所述的防治莲雾果实拟盘多毛孢果腐病及炭疽病的纳米银复合芽孢杆菌菌剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)微生物菌种子液的制备：将解淀粉芽孢杆菌HW05在LB液体培养基中，于37℃，180rpm的条件下进行培养24h，生产解淀粉芽孢杆菌HW05种子液；将枯草芽孢杆菌BLG010在LB液体培养基中，于37℃，180rpm的条件下进行培养24h，生产枯草芽孢杆菌BLG010种子液；

(2)纳米银复合芽孢杆菌菌悬液的制备：按重量份计，在立式发酵罐中加入有机发酵营养基、无机发酵营养基、蒸馏水，搅拌均匀后经高压蒸汽灭菌，在温度降至37℃以下后，加入解淀粉芽孢杆菌HW05种子液，6小时后加入枯草芽胞杆菌BLG010种子液，通入无菌空气，通气量为16～19L/min，保压0.02～0.04MPa，恒温34～38℃，转速170～200rpm，8小时后加入硝酸银溶液，经过70～80h的发酵时间，当孢子浓度达到8.0×10⁸个/mL～1×10⁹个/mL且纳米银产率80％时停止发酵；将温度提高至55-65℃，转速110～140rpm，保持4～6h；在20～30℃进行离心，离心参数为1200-1400rpm，时间为10-12min，弃去上清液，按重量比计，加入蒸馏水和沉淀重量比为25～35:1，获得纳米银复合芽孢杆菌菌悬液；

(3)纳米银复合芽孢杆菌菌剂的制备：按重量份计，将步骤(2)制得的纳米银复合芽孢菌菌悬液与瓜尔豆胶、脂肪醇聚氧乙烯醚、聚乙烯吡咯烷酮、蓖麻油聚氧乙烯醚、环丙嘧啶醇混合均匀，获得纳米银复合芽孢杆菌菌剂。

7.如权利要求6所述的防治莲雾果实拟盘多毛孢果腐病及炭疽病的纳米银复合芽孢杆菌菌剂的制备方法，其特征在于，步骤(3)整个配置过程在温度60℃条件下进行。

8.如权利要求1所述的防治莲雾果实拟盘多毛孢果腐病及炭疽病的纳米银复合芽孢杆菌菌剂，其特征在于，纳米银复合芽孢杆菌菌剂用水稀释500-600倍后使用，在莲雾果实表面喷施使用。