[发明专利]用于细胞培育肉制造的复合微载体及其制备方法

说明书

本发明公开了一种用于细胞培育肉制造的复合微载体及其制备方法，该复合微载体，它包括微载体球，所述微载体球的表面为网状结构，所述微载体球包括多糖、醛酸和蛋白，所述多糖、醛酸和蛋白的摩尔百分比为70～80％：15～25％：3～5％，在所述微载体球的表面设置表面处理层，所述表面处理层包括蛋白和多聚赖氨酸，所述蛋白和多聚赖氨酸的摩尔百分比为35～90％：10～20％。本发明可以促进贴壁的成肌细胞快速的进入分化阶段并随之促进成肌细胞实现生肌功能。

技术领域

本发明涉及一种用于细胞培育肉制造的复合微载体及其制备方法。

背景技术

细胞培育肉制造具有提供真正的肉类产品的潜力，而探索更为高效的细胞培养及分化的处理手段是世界范围内细胞培育肉制造面临的重要课题。

细胞的培养可以通过发酵罐、细胞工厂等进行大规模的细胞生产，而关于细胞的分化、生肌相关研究目前鲜有报道。尤其是成肌细胞的分化方向的研究，尚没有发表可以有效调控促进成肌细胞分化的载体出现。因此，细胞培育肉研究中可以有效促进成肌细胞分化的相关设备、方法及载体亟待解决。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供一种可以促进贴壁的成肌细胞快速的进入分化阶段并随之促进成肌细胞实现生肌功能的用于细胞培育肉制造的复合微载体。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：一种用于细胞培育肉制造的复合微载体，它包括微载体球，所述微载体球的表面为网状结构，所述微载体球包括多糖、醛酸和蛋白，所述多糖、醛酸和蛋白的摩尔百分比为70～80％：15～25％：3～5％，在所述微载体球的表面设置表面处理层，所述表面处理层包括蛋白和多聚赖氨酸，所述蛋白和多聚赖氨酸的摩尔百分比为35～90％：10～20％。需要说明的是，上述70～80％等表达方式为区间值，即70％到80％之间。

优选的，所述表面处理层的蛋白包括丝素蛋白和胶原蛋白，且丝素蛋白、多聚赖氨酸和胶原蛋白的摩尔百分比为30～80％：10～20％：5～10％。

进一步的，所述微载体球的多糖、醛酸和蛋白的摩尔百分比为75％：20％：5％；所述表面处理层的丝素蛋白、多聚赖氨酸和胶原蛋白的摩尔百分比为75％：20％：5％。

一种制备用于细胞培育肉制造的复合微载体的方法，包括如下步骤：

第一步：在水中按照多糖、醛酸和蛋白的摩尔百分比为70～80％：15～25％：3～5％将三者混匀后灭菌，然后通过微粒发生器进入到Ca2+溶液中形成微载体球；

第二步：将微载体球置于孔径为20-100um的虑筛上，将虑筛置于酸性溶液中，摇动虑筛改变载体与虑筛接触位置，直至载体表面充满网状结构；

第三步：将蛋白和多聚赖氨酸配成摩尔百分比为35～90％：10～20％的溶液，将微载体球转入该溶液中10-24h，完成微载体球的表面处理；

第四步：将表面处理后的微载体球进行晾晒，使其表面水分蒸发后呈褶皱状态，将载体转入饱和的丝素蛋白溶液中浸润保存。

本发明的有益效果：

本发明相对于基于聚苯乙烯材料合成的微载体和基于动物源蛋白合成的微载体来说，材料成本和制作成本明显降低，且环保可食用。载体表面生物相容性高。表面纹路设计利于细胞分化伸展形成肌管生成肌纤维。

本发明中载体针对成肌细胞分化，可提供多种细胞培养方式，包括灌流方式、平面培养方式等形成固定形态的培育肉，也可以通过大规模培养模式形成不定型的细胞肌纤维载体螯合物。

本发明中的载体基于天然多糖类材料、蛋白类辅助材料以及表面处理后，可有效刺激成肌细胞贴壁后细胞的自我调控，改变细胞基因表达及信号通路，促使细胞进入分化阶段，进而促进肌管的形成及肌纤维的产生。