[发明专利]一种C-反应蛋白检测试剂冻干微球及制备方法

权利要求书

1.一种C-反应蛋白检测试剂冻干微球，其特征在于：检测试剂中含有标记抗人CRP抗体的胶体金颗粒，所述胶体金颗粒的粒径为20nm～60nm，所述抗人CRP抗体与胶体金溶液的添加比为5～20μg/mL。

2.根据权利要求1所述的一种C-反应蛋白检测试剂冻干微球，其特征在于，所述检测试剂的组成为：标记抗人CRP抗体的胶体金颗粒0.01％～0.05％、促凝剂0.5％～2％、底物保护剂0.5％～2％、表面活性剂0.1％～1％、冻干稳定剂0.05％～0.5％、防腐剂0.01％～0.1％、缓冲液5～200mmol/L。

3.根据权利要求2所述的一种C-反应蛋白检测试剂冻干微球，其特征在于：所述缓冲液为磷酸盐缓冲液、Tris-Hcl缓冲液、硼酸盐缓冲液、甘氨酸缓冲液、碳酸盐缓冲液或PBS缓冲液的一种。

4.根据权利要求3所述的一种C-反应蛋白检测试剂冻干微球，其特征在于：所述促凝剂为PEG8000、PEG20000或聚乙二醇中的一种或多种。

5.根据权利要求4所述的一种C-反应蛋白检测试剂冻干微球，其特征在于：所述抗人CRP抗体为多克隆抗体或单克隆抗体的一种或两种混合。

6.根据权利要求5所述的一种C-反应蛋白检测试剂冻干微球，其特征在于：所述底物保护剂为PEG4000、PEG8000、PEG20000或聚乙二醇中的一种或多种。

7.根据权利要求6所述的一种C-反应蛋白检测试剂冻干微球，其特征在于：所述表面活性剂为吐温-20、吐温-40、吐温-80，TritonX-100或聚氧乙烯月桂醚Brij35中的一种或多种。

8.根据权利要求7所述的一种C-反应蛋白检测试剂冻干微球，其特征在于：所述冻干稳定剂为海藻糖、蔗糖、乳糖或BSA中的一种或多种。

9.根据权利要求8所述的一种C-反应蛋白检测试剂冻干微球，其特征在于：所述防腐剂为叠氮钠、硫柳汞、山梨酸钾、Proclin-300中的一种或多种。

10.一种C-反应蛋白检测试剂冻干微球及制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1：胶体金的制备，将氯金酸溶液加入到去离子水或超纯水中，加热搅拌后加入新配制的二水合柠檬酸三钠，待溶液由浅黄变为无色再变为酒红色后，继续加热搅拌10min，冷却至室温至室温后4℃保存备用；

S2：标记抗人CRP抗体胶体金颗粒的制备，加入胶体金溶液，用碳酸钾调节pH后加抗人CRP抗体，混合反应后加入封闭剂进行封闭，而后离心并去掉上清液，再用重悬液悬浮沉淀即得胶体金-抗人CRP抗体复合物；所述重悬液包括如下质量份的原料：缓冲液5～200mmol/L、封闭剂0.01％～2％、稳定剂1％～20％和防腐剂0.01％～0.1％；

S3：配制检测试剂并冻干，按比例配制检测试剂后进行分液滴珠并冷冻干燥处理，所述冷冻干燥处理包括预冻、升华干燥和解析干燥，预冻的条件为：-35℃、1h；升华干燥的条件为：-30℃、60min；-20℃、60min；-10℃、60min；0℃、60min依次进行；解析干燥的条件为：5℃、60min；15℃、60min依次进行；制备成的冻干微球为2ul-10ul/滴。