[发明专利]一种C-反应蛋白检测试剂冻干微球及制备方法

说明书

本发明涉及冻干微球制备领域，公开了一种C‑反应蛋白检测试剂冻干微球，检测试剂中含有标记抗人CRP抗体的胶体金颗粒，胶体金颗粒的粒径为20nm～60nm，抗人CRP抗体与胶体金溶液的添加比为5～20μg/mL。微球的制备方法，包括S1：胶体金的制备；S2：标记抗人CRP抗体胶体金颗粒的制备，加入胶体金溶液，调节pH值后加抗人CRP抗体，混合反应后加入封闭剂，而后离心并去掉上清液，再用重悬液悬浮沉淀即得胶体金‑抗人CRP抗体复合物；S3：配制检测试剂并冻干，按比例配制检测试剂后分液滴珠并冷冻干燥，制备成的冻干微球为2ul‑10ul/滴。本发明的C‑反应蛋白检测试剂冻干微球具有特异性强、灵敏度高、稳定性好、抗干扰能力强、操作简便等优点，非常适合即时检测技术(POCT)应用。

技术领域

本发明涉及冻干微球制备领域，具体涉及一种C-反应蛋白检测试剂冻干微球及制备方法。

背景技术

C-反应蛋白(C-reaction protein，CRP)是一种结构为正五聚体的急性时相蛋白，机体在各种炎症过程、组织坏死与组织损伤时(如外科手术后)，炎性细胞因子如IL-6释放CRP致使血清中浓度升高。由于C-反应蛋白通常在细菌感染后增高，而病毒感染时不增高，具有很好的稳定性及精确性，是炎症和组织损伤的非特异性标志物。人类的CRP由5个相同的非糖基化多肽亚基组成，每个亚基包含206个氨基酸残基和两个钙离子结合位点所以常用来作为鉴别细菌和病毒感染的一个首选指标。

目前C-反应蛋白常用检测方法有免疫层析法、胶乳凝集法、胶乳增强免疫比浊法和发光法。这些方法的原理是利用抗原抗体产生免疫应答反应，产生聚集、凝集和沉淀等，借助其他方式产生或放大这种变化达到检测的目的。其中，胶体金免疫层析法直接目测颜色深浅或灰度扫描，操作简单检测快速，而且不需要仪器或仅需简单仪器，适合现场检测。但免疫层析法灵敏度较低，检测范围一般为10～200mg/L，在正常范围内低程度炎症反应(如心血管事件)的预测不够灵敏。而胶乳凝集法和胶乳增强免疫比浊法灵敏度较高且已实现了自动化，利用血清中得C-反应蛋白与结合在胶乳颗粒表面的抗人C-反应蛋白抗体结合，产生抗原抗体反应，使胶乳颗粒形成凝集。自动生化仪监测此凝集反应在600nm处的吸光度，对照标准曲线可求出C-反应蛋白的含量。胶乳增强免疫比浊法自动化程度高，检测准确度高，但是需要专业化仪器设备和专业人员，专业实验室操作，所需样品量大及维护成本高等问题，因此亟需提供一种操作简单、稳定性好且检测效率高的C-反应蛋白及时检测方法。

发明内容

本发明意在提供一种C-反应蛋白检测试剂冻干微球及制备方法，以解决现有的C-反应蛋白检测方法中存在的所需样品量大及维护成本高的问题。

为达到上述目的，本发明采用如下技术方案：一种C-反应蛋白检测试剂冻干微球，检测试剂中含有标记抗人CRP抗体的胶体金颗粒，胶体金颗粒的粒径为20nm～60nm，所述抗人CRP抗体与胶体金溶液的添加比为5～20μg/mL。

本技术方案还提供一种C-反应蛋白检测试剂冻干微球及制备方法，包括如下步骤：

S1：胶体金的制备，将氯金酸溶液加入到去离子水或超纯水中，加热搅拌后加入新配制的二水合柠檬酸三钠，待溶液由浅黄变为无色再变为酒红色后，继续加热搅拌10min，冷却至室温至室温后4℃保存备用；

S2：标记抗人CRP抗体胶体金颗粒的制备，加入胶体金溶液，用碳酸钾调节pH值后加抗人CRP抗体，混合反应后加入封闭剂进行封闭，而后离心并去掉上清液，再用重悬液悬浮沉淀即得胶体金-抗人CRP抗体复合物；所述重悬液包括如下质量份的原料：缓冲液5～200mmol/L、封闭剂0.01％～2％、稳定剂1％～20％和防腐剂0.01％-0.1％；