[发明专利]一种用于检测葡萄球菌属耐药性的引物和探针组合物及其试剂盒

说明书

本发明属于生物检测技术领域，公开了一种用于检测葡萄球菌属耐药性的引物和探针组合物及其试剂盒。该试剂盒是以金黄色葡萄球菌和其他葡萄球菌基因组中的保守序列，及耐甲氧西林基因的保守序列为基础，设计的反应体系在革兰氏阳性菌的尺度上，实现快速、同步、判定、检测多种葡萄球菌，包括金黄色葡萄球菌、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、木糖葡萄球菌、表皮葡萄球菌、头状葡萄球菌以及耐甲氧西林基因。适用环境便捷，可用于快速检测拭子或痰液样本中的多种葡萄球菌，并且判定其是否携带耐甲氧西林基因。检测结果可用于辅助诊断由葡萄球菌造成的感染，并且对临床用药提供指导。成本低、准确度高、靶基因保守度高、检测覆盖度高。

技术领域

本发明属于生物检测技术领域，具体涉及一种用于检测葡萄球菌属耐药性的引物和探针组合物及其试剂盒。

背景技术

葡萄球菌属(genius)包含超过四十种(species)革兰氏阳性菌，其中有若干种具有致病性。其中金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)是最常见的导致人类化脓性感染的病原菌。

金黄色葡萄球菌可引起局部化脓性感染，如疖、痈、皮下脓肿、外科切口及烧伤创面的感染；也可引起肺炎、伪膜性肠炎、肾盂肾炎、心包炎等多系统的化脓性感染；还可引起败血症、脓毒症等全身性感染。耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistantStaphylococcus aureus，MRSA)是引起医院获得性和社区相关性感染的重要病原菌。

自1961年首次发现MRSA以来，其在金黄色葡萄球菌中分离率不断上升，据2009年中国CHINET细菌耐药性监测报告，我国10省市14所教学医院临床分离出的4114株金黄色葡萄球菌中MRSA比率高达52.7％(2010年的情况类似，4452株金黄色葡萄球菌中MRSA的比率为51.7％)。多数医院获得性金黄色葡萄球菌肺炎(HA-MRSA)对甲氧西林和所有β-内酰胺类耐药，且常为多重耐药，可选择药物十分有限。而社区获得性金黄色葡萄球菌肺炎(CA-MRSA)通常仅对β-内酰胺类耐药，对非β-内酰胺类抗生素敏感。试验鉴别甲氧西林敏感的金黄色葡萄球菌(Methicillin-Sensitive Staphylococcus aureus，MSSA)与MRSA，这一点非常重要，因为抗生素的选择可以决定临床治疗是否有效。

目前国内对于金黄色葡萄球菌和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌核酸检测方法有实时荧光PCR法、乳胶凝集法、细菌培养法、胶体金法。其中胶体金法是对病毒的蛋白质进行检测；热裂解将MRSA中的PBP-2a提取出来，加入PBP-2a特异性单克隆抗体致敏的乳胶颗粒溶液，出现肉眼可见的特异性凝集现象，然而其后期细菌培养法检测周期较长。相比较而言，荧光PCR是针对遗传物质DNA/RNA进行检测的手段，从准确度上来说，荧光PCR探针法准确度更高。目前国内大多数耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的核酸检测试剂盒，仅针对抗性Mec基因进行检测，缺乏对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌本身的核酸序列检测。

除金黄色葡萄球菌以外，葡萄球菌属中仍然有其他潜在的致病菌，如：表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)、头状葡萄球菌(Staphylococcus capitis)。以上两种细菌都属于人体正常的共生菌落，一般情况下不会致病。但是在手术后，或者患者接受外科植入物之后，这些细菌可能侵入机体造成感染，并引起发炎症状。同时，它们也有可能获得抗生素抗性，从而使常规的临床诊疗手段变得低效。

现有的文件中公开了一种基于RNA恒温扩增-金探针层析技术联合检测金黄色葡萄球菌及耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐药基因mecA核酸的试剂盒，该技术方案是为了解决在利用双重检测技术的基础上，实现对金黄色葡萄球菌SA基因和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐药基因mecA的检测的目的，该公开文件仅实现了对单一的金黄色葡萄球菌的某一具体基因进行检测，缺乏关于葡萄球菌的其他菌属的检测；以及对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐药基因mecA进行检测，缺乏对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌本身的核酸序列检测。